| 摘要 | 第3-5页 |
| abstract | 第5-6页 |
| 术语及符号说明 | 第10-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-24页 |
| 1.1 菊粉 | 第11-14页 |
| 1.1.1 菊粉的化学结构 | 第11-13页 |
| 1.1.2 菊粉的理化性质 | 第13-14页 |
| 1.2 菊粉酶研究概况 | 第14-20页 |
| 1.2.1 菊粉酶的定义 | 第14页 |
| 1.2.2 菊粉酶的分类 | 第14-15页 |
| 1.2.3 菊粉酶的来源与性质 | 第15-16页 |
| 1.2.4 菊粉酶的结构及催化机制 | 第16-18页 |
| 1.2.5 菊粉酶基因在大肠杆菌表达系统中表达 | 第18-19页 |
| 1.2.6 菊粉酶的酶活测定方式 | 第19-20页 |
| 1.3 菊粉酶的应用 | 第20-23页 |
| 1.3.1 菊粉酶在高果糖浆生产中的应用 | 第20-21页 |
| 1.3.2 菊粉酶在低聚果糖生产中的应用 | 第21-22页 |
| 1.3.3 菊粉酶在酒精生产中的应用 | 第22-23页 |
| 1.4 研究背景和意义 | 第23页 |
| 1.5 研究内容 | 第23-24页 |
| 第2章 菊粉酶基因的理性设计及表达、纯化 | 第24-43页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 2.1.3 主要试剂和材料 | 第24-25页 |
| 2.1.4 常用溶液 | 第25-26页 |
| 2.1.5 常用培养基 | 第26页 |
| 2.1.6 DNA测序与引物合成 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-33页 |
| 2.2.1 序列分析 | 第26-27页 |
| 2.2.2 原核表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.3 重组质粒的转化和鉴定 | 第28页 |
| 2.2.4 重组子在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中的诱导表达 | 第28-29页 |
| 2.2.5 重组子的纯化和鉴定 | 第29-32页 |
| 2.2.6 重组突变体的构建及突变酶的转化、表达及纯化 | 第32-33页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第33-41页 |
| 2.3.1 重组外切菊粉酶的序列与结构分析 | 第33-37页 |
| 2.3.2 重组外切菊粉酶InuAGN25DVS的基因表达 | 第37-39页 |
| 2.3.3 重组外切菊粉酶的纯化和鉴定 | 第39-41页 |
| 2.4 讨论 | 第41-42页 |
| 2.5 本章小结 | 第42-43页 |
| 第3章 外切菊粉酶酶学性质研究 | 第43-58页 |
| 3.1 实验材料 | 第43页 |
| 3.1.1 主要试剂、材料 | 第43页 |
| 3.2 实验方法 | 第43-45页 |
| 3.2.1 酶液的透析 | 第43页 |
| 3.2.2 重组外切菊粉酶的酶活测定方法 | 第43-44页 |
| 3.2.3 重组外切菊粉酶的酶学特性分析 | 第44-45页 |
| 3.3 实验结果与分析 | 第45-54页 |
| 3.3.1 纯化的外切菊粉酶MutE137Δ5的酶学特性分析 | 第45-48页 |
| 3.3.2 纯化的外切菊粉酶Mut8S的酶学特性分析 | 第48-51页 |
| 3.3.3 纯化的菊粉酶MutQ23Δ3的酶学特性分析 | 第51-54页 |
| 3.4 讨论 | 第54-56页 |
| 3.5 本章小结 | 第56-58页 |
| 第4章 总结与展望 | 第58-60页 |
| 4.1 主要结论 | 第58-59页 |
| 4.2 创新 | 第59页 |
| 4.3 展望 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-66页 |
| 附录 | 第66-76页 |
| 附录A 本文所涉及到的氨基酸序列 | 第66-69页 |
| A1 InuAGN25DVS的氨基酸序列 | 第66页 |
| A2 HRV3Cprotease酶切InuAGN25DVS的氨基酸序列 | 第66-67页 |
| A3 MutE137Δ5的氨基酸序列 | 第67页 |
| A4 Mut8S的氨基酸序列 | 第67-68页 |
| A5 MutQ23Δ3的氨基酸序列 | 第68-69页 |
| 附录B 本文所涉及到的核酸序列图 | 第69-73页 |
| 附录C 实验中所使用的缓冲液的配置 | 第73-75页 |
| C1不同pH值的柠檬酸-磷酸氢二钠缓冲液的配制 | 第73-74页 |
| C2不同pH值的甘氨酸-NaOH缓冲液的配制 | 第74-75页 |
| 附录D 氨基酸中英文对照及缩写表 | 第75-76页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和研究成果 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
