| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12页 |
| 第一章 前言 | 第13-25页 |
| 1 海洋石油污染现状、危害及防治 | 第13-14页 |
| 1.1 海洋石油污染的现状其危害 | 第13-14页 |
| 1.2 海洋石油污染的防治方法 | 第14页 |
| 2 海洋石油烃降解微生物 | 第14-18页 |
| 2.1 海洋石油烃降解微生物概况 | 第14-15页 |
| 2.2 食烷菌（Alcanivorax）研究进展 | 第15-16页 |
| 2.3 本实验关于柴油食烷菌Alcanivorax dieselolei B5的研究 | 第16-18页 |
| 3 细菌呼吸链 | 第18-20页 |
| 3.1 细菌的递氢与受氢 | 第18-19页 |
| 3.2 细菌有氧呼吸呼吸链及末端氧化酶 | 第19-20页 |
| 3.3 柴油食烷菌（Alcanivorax dieselolei）B5中的Cyo末端氧化酶 | 第20页 |
| 4 原核生物中的双组份系统（Two-Component Systems, TCS ） | 第20-24页 |
| 5 本研究的目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 材料与方法 | 第25-48页 |
| 1 材料 | 第25-31页 |
| 1.1 菌种 | 第25页 |
| 1.2 培养基 | 第25页 |
| 1.3 主要试剂 | 第25-26页 |
| 1.4 常用溶液 | 第26-30页 |
| 1.5 PCR引物 | 第30页 |
| 1.6 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2 实验方法 | 第31-48页 |
| 2.1 目的基因挖掘 | 第31页 |
| 2.2 目的蛋白结构分析 | 第31-32页 |
| 2.2.1 目的基因核酸序列转化成氨基酸序列 | 第31-32页 |
| 2.2.2 蛋白序列比对 | 第32页 |
| 2.2.3 B5_00995 基因编码蛋白等电点及相关参数分析 | 第32页 |
| 2.2.4 B5_00995 基因编码蛋白二级结构分析 | 第32页 |
| 2.2.5 B5_00995 基因编码蛋白跨膜结构预测 | 第32页 |
| 2.2.6 B5_00995 基因编码蛋白三级结构预测 | 第32页 |
| 2.3 细菌基因组DNA提取 | 第32-33页 |
| 2.4 目的基因扩增 | 第33-34页 |
| 2.5 PCR产物纯化 | 第34-35页 |
| 2.6 载体与目的基因的双酶切 | 第35-36页 |
| 2.7 DNA片段琼脂糖凝胶电泳检测 | 第36页 |
| 2.8 DNA片段浓度检测 | 第36页 |
| 2.9 琼脂糖凝胶回收双酶切的载体片段 | 第36页 |
| 2.10 构建表达载体 | 第36-37页 |
| 2.11 表达载体转化至大肠杆菌DH5α 感受态细胞 | 第37页 |
| 2.12 阳性克隆筛选 | 第37-39页 |
| 2.13 表达载体质粒提取及验证 | 第39页 |
| 2.14 表达载体转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞 | 第39-40页 |
| 2.15 目的蛋白的纯化 | 第40-42页 |
| 2.15.1 B5_00995 编码膜蛋白的体外表达纯化 | 第40-41页 |
| 2.15.1.1 膜蛋白的诱导表达 | 第40页 |
| 2.15.1.2 膜蛋白的体外纯化 | 第40-41页 |
| 2.15.2 B5_00996 编码蛋白的体外表达纯化 | 第41-42页 |
| 2.15.2.1 B5_00996 编码蛋白的体外表达纯化 | 第41页 |
| 2.15.2.2 游离蛋白的体外纯化 | 第41-42页 |
| 2.16 SDS-PAGE检测蛋白纯化效果 | 第42-43页 |
| 2.17 免疫印迹实验验证目的蛋白 | 第43-44页 |
| 2.18 疏水作用层析纯化目的蛋白 | 第44-45页 |
| 2.19 阴离子交换剂层析纯化目的蛋白 | 第45页 |
| 2.20 蛋白透析与保存 | 第45页 |
| 2.21 超滤管去除透析液 | 第45-46页 |
| 2.22 磷酸化实验 | 第46-47页 |
| 2.22.1 B5_00995 编码蛋白自我磷酸化实验 | 第46页 |
| 2.22.2 双组份系统磷酸化反应实验 | 第46页 |
| 2.22.3 醌对激酶自我磷酸化抑制实验 | 第46-47页 |
| 2.23 磷酸化蛋白检测 | 第47-48页 |
| 第三章 结果与分析 | 第48-63页 |
| 1 相关基因与蛋白分析与科学假设 | 第48-53页 |
| 1.1 相关基因与蛋白分析 | 第48-52页 |
| 1.2 分析结果 | 第52-53页 |
| 2 目的蛋白的表达纯化 | 第53-57页 |
| 2.1 B5T_00995 基因编码膜蛋白的表达纯化 | 第53-55页 |
| 2.2 B5T_00996 基因编码蛋白的表达纯化 | 第55-57页 |
| 3 体外磷酸化实验 | 第57-63页 |
| 3.1 激酶组分的自我磷酸化实验 | 第57-58页 |
| 3.2 双组份之间的磷酸化反应 | 第58-59页 |
| 3.3 醌对激酶组分的影响 | 第59-61页 |
| 3.4 结论 | 第61-63页 |
| 第四章 讨论 | 第63-74页 |
| 1 双组份系统感应呼吸醌调控烷烃代谢 | 第63-67页 |
| 2 Cyo末端氧化酶调控双组份系统 | 第67-69页 |
| 3 磷酸化蛋白质组证明双组份磷酸化情况 | 第69-72页 |
| 4 展望 | 第72-74页 |
| 参考文献 | 第74-79页 |
| 致谢 | 第79页 |
