| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 前言 | 第14-17页 |
| 第一章 疫苗的制备 | 第17-23页 |
| 1.1 实验材料与方法 | 第17-18页 |
| 1.1.1 实验材料 | 第17页 |
| 1.1.2 主要实验试剂和仪器 | 第17-18页 |
| 1.1.3 主要试剂的配置 | 第18页 |
| 1.2 实验方法 | 第18-20页 |
| 1.2.1 RM-1细胞培养 | 第18-19页 |
| 1.2.2 细胞传代 | 第19页 |
| 1.2.3 细胞冻存 | 第19页 |
| 1.2.4 细胞计数及细胞活性检测 | 第19-20页 |
| 1.2.5 SA-mGM-CSF膜修饰RM-1前列腺癌细胞疫苗的制备 | 第20页 |
| 1.2.6 检测肿瘤细胞疫苗的锚定率 | 第20页 |
| 1.3 实验结果 | 第20-21页 |
| 1.3.1 流式分析结果 | 第20-21页 |
| 1.4 讨论 | 第21-22页 |
| 1.5 结论 | 第22-23页 |
| 第二章 ICOS封闭性抗体联合疫苗治疗小鼠前列腺癌 | 第23-44页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第23-25页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 主要实验试剂和仪器 | 第23-25页 |
| 2.1.3 主要试剂的配制 | 第25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-29页 |
| 2.2.1 C57BL/6小鼠皮下前列腺癌模型的建立 | 第25-26页 |
| 2.2.2 小鼠前列腺癌皮下模型各组小鼠的肿瘤大小 | 第26页 |
| 2.2.3 流式细胞术检测血液中DC细胞、CD4~+T和CD8~+T淋巴细胞 | 第26页 |
| 2.2.4 流式细胞术检测脾脏中ICOS~+Treg细胞 | 第26-27页 |
| 2.2.5 免疫组化检测肿瘤组织中CD4~+T和CD8+T淋巴细胞 | 第27-28页 |
| 2.2.6 免疫荧光检测肿瘤组织中ICOS~+Treg细胞 | 第28页 |
| 2.2.7 ELISA检测血清中IFN-γ，IL-4和IL-10的含量 | 第28-29页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第29页 |
| 2.3 实验结果 | 第29-42页 |
| 2.3.1 C57 BL/6小鼠前列腺癌皮下模型的建立 | 第29页 |
| 2.3.2 肿瘤体积大小 | 第29-31页 |
| 2.3.3 流式细胞术分析血液中DC细胞的比例 | 第31-33页 |
| 2.3.4 流式检测小鼠外周血中的T细胞亚群的变化 | 第33-35页 |
| 2.3.5 免疫组化检测肿瘤组织中浸润性CD4~+T和CD8~+T细胞的含量 | 第35-36页 |
| 2.3.6 流式分析小鼠脾脏中的ICOS~+Tregs细胞的变化 | 第36-38页 |
| 2.3.7 免疫组化检测肿瘤组织中ICOS~+ Treg细胞的含量 | 第38-40页 |
| 2.3.8 ELISA检测血清中IFN-γ,IL-4和IL-10的含量 | 第40-42页 |
| 2.4 讨论 | 第42-43页 |
| 2.5 结论 | 第43-44页 |
| 第三章 NCTD对Tregs的影响及其联合疫苗治疗小鼠前列腺癌的疗效 | 第44-71页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第44-48页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第44页 |
| 3.1.2 主要实验试剂和仪器 | 第44-46页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制 | 第46-48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-56页 |
| 3.2.1 脾细胞悬液的制备 | 第48-49页 |
| 3.2.2 分选CD4~+CD25~+Treg细胞 | 第49页 |
| 3.2.3 细胞培养 | 第49-50页 |
| 3.2.4 NCTD作用Treg细胞 | 第50页 |
| 3.2.5 CCK8检测Treg细胞增殖 | 第50页 |
| 3.2.6 流式检测Treg细胞凋亡 | 第50页 |
| 3.2.7 NCTD处理后的Treg细胞总蛋白的提取 | 第50页 |
| 3.2.8 western bloting检测目的蛋白的表达 | 第50-51页 |
| 3.2.9 提取NCTD处理后的Treg细胞的总RNA | 第51-52页 |
| 3.2.10 Real Time PCR | 第52-54页 |
| 3.2.11 SA-mGM-CSF膜修饰的前列腺癌细胞疫苗的制备 | 第54页 |
| 3.2.12 建立C57BL/6小鼠皮下前列腺癌模型 | 第54页 |
| 3.2.13 小鼠前列腺癌皮下模型的各组小鼠皮下肿瘤大小 | 第54页 |
| 3.2.14 流式检测血液中淋巴细胞的比例 | 第54-55页 |
| 3.2.15 免疫组化检测肿瘤组织中淋巴细胞的含量 | 第55页 |
| 3.2.16 免疫荧光检测肿瘤组织中Treg细胞的含量 | 第55页 |
| 3.2.17 统计学分析 | 第55-56页 |
| 3.3 实验结果 | 第56-68页 |
| 3.3.1 CCK8检测细胞增殖结果 | 第56-57页 |
| 3.3.2 流式检测Treg细胞凋亡结果 | 第57-60页 |
| 3.3.3 Western blotting结果 | 第60-61页 |
| 3.3.4 Real Time PCR结果 | 第61-62页 |
| 3.3.5 小鼠前列腺癌皮下模型的建立及肿瘤体积大小 | 第62-63页 |
| 3.3.6 流式检测血液中DC细胞的含量 | 第63-65页 |
| 3.3.7 NCTD联合疫苗治疗后小鼠血液和肿瘤组织中Treg细胞含量 | 第65-66页 |
| 3.3.8 NCTD联合疫苗治疗后小鼠血液和肿瘤CD4~+T和CD8~+T含量 | 第66-68页 |
| 3.4 讨论 | 第68-70页 |
| 3.5 结论 | 第70-71页 |
| 全文总结与展望 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 中英文缩略词表 | 第79-81页 |
| 成果 | 第81-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
