| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 前言 | 第7-8页 |
| 第一篇 文献综述 | 第8-18页 |
| 第一章 猪繁殖与呼吸综合征概述 | 第8-18页 |
| 1.1 PRRSV概述 | 第8页 |
| 1.2 病原学 | 第8-9页 |
| 1.3 PRRSV的基因结构与功能 | 第9页 |
| 1.4 PRRSV结构蛋白GP5的编码及功能 | 第9-10页 |
| 1.5 PRRSV非结构蛋白Nsp7的编码及功能 | 第10-11页 |
| 1.6 PRRSV在猪呼吸道的免疫发病机理 | 第11-14页 |
| 1.7 PRRSV的检测方法 | 第14-18页 |
| 第二篇 研究内容 | 第18-41页 |
| 第一章 PRRSV GP5蛋白和Nsp7蛋白的诱导表达 | 第18-34页 |
| 1 实验材料 | 第18-20页 |
| 1.1 病毒和菌株 | 第18页 |
| 1.2 主要仪器和设备 | 第18页 |
| 1.3 载体及试剂盒 | 第18-19页 |
| 1.4 主要试剂的配制 | 第19-20页 |
| 2 实验方法 | 第20-27页 |
| 2.1 目的基因的扩增及鉴定 | 第20-21页 |
| 2.2 重组质粒pMD18-T-GP5和pMD18-T-Nsp7的构建 | 第21-24页 |
| 2.3 重组质粒pET28a-GP5和pET28a-Nsp7的构建 | 第24页 |
| 2.4 目的蛋白的诱导表达 | 第24-26页 |
| 2.5 目的蛋白的纯化 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-32页 |
| 3.1 PRRSV GP5和Nsp7基因的扩增及鉴定 | 第27-28页 |
| 3.2 重组质粒pMD18-T-GP5和pMD18-T-Nsp7的筛选与鉴定 | 第28-29页 |
| 3.3 目的蛋白的诱导表达 | 第29-31页 |
| 3.4 重组蛋白的纯化及Western blot | 第31-32页 |
| 4 讨论 | 第32-33页 |
| 5 小结 | 第33-34页 |
| 第二章 PRRSV重组GP5蛋白和Nsp7蛋白ELISA检测方法的建立 | 第34-41页 |
| 1 实验材料 | 第34页 |
| 1.1 主要溶液的配制 | 第34页 |
| 2 方法 | 第34-36页 |
| 2.1 间接ELISA检测方法的建立及优化 | 第34-36页 |
| 3 结果 | 第36-39页 |
| 3.1 抗原包被浓度、血清稀释倍数的优化 | 第36-37页 |
| 3.2 抗原包被时间的选择 | 第37页 |
| 3.3 封闭条件的优化 | 第37页 |
| 3.4 血清反应时间的优化 | 第37-38页 |
| 3.5 酶标二抗工作条件的优化 | 第38-39页 |
| 3.6 特异性试验 | 第39页 |
| 3.7 间接ELISA检测方法的建立 | 第39页 |
| 4 讨论 | 第39-40页 |
| 5 小结 | 第40-41页 |
| 结论 | 第41-42页 |
| 参考文献 | 第42-48页 |
| 作者简介 | 第48-49页 |
| 致谢 | 第49页 |
