| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第1章 引言 | 第15-43页 |
| 1.1 生物标志物检测概述 | 第15-16页 |
| 1.2 核酸分析技术进展 | 第16-26页 |
| 1.2.1 变温核酸扩增技术 | 第16页 |
| 1.2.2 恒温核酸扩增技术 | 第16-26页 |
| 1.3 微型化核酸检测技术 | 第26-38页 |
| 1.3.1 现场检测技术概述 | 第26页 |
| 1.3.2 基于微流控芯片的核酸检测 | 第26-32页 |
| 1.3.3 纸基核酸检测技术 | 第32-38页 |
| 1.4 本论文的选题依据及研究内容 | 第38-43页 |
| 1.4.1 选题依据及意义 | 第38-39页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第39-43页 |
| 第2章 多重可视化微流控LAMP的疟疾传播检测应用 | 第43-57页 |
| 2.1 研究背景 | 第43-44页 |
| 2.2 实验部分 | 第44-48页 |
| 2.2.1 实验材料与药品 | 第44页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第44-45页 |
| 2.2.3 六种目标的保守靶序列选择和LAMP引物设计筛选 | 第45页 |
| 2.2.4 LAMP反应体系 | 第45-46页 |
| 2.2.5 蚊子及疟原虫核酸提取 | 第46-47页 |
| 2.2.6 可视化mμLAMP阵列检测 | 第47页 |
| 2.2.7 凝胶电泳实验 | 第47-48页 |
| 2.2.8 统计学分析 | 第48页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第48-55页 |
| 2.3.1 六种目标的特异性基因选择和LAMP引物设计筛选 | 第48-51页 |
| 2.3.2 六种目标的检测敏感性评价 | 第51-52页 |
| 2.3.3 可视化LAMP反应的体积影响 | 第52-53页 |
| 2.3.4 基于mμLAMP的六靶标同时检测验证 | 第53页 |
| 2.3.5 基于mμLAMP的六靶标特异性验证 | 第53-54页 |
| 2.3.6 基于mμLAMP的不同蚊媒检测评价 | 第54-55页 |
| 2.4 本章小结 | 第55-57页 |
| 第3章 MERS-CoV多重微流控荧光LAMP检测系统 | 第57-67页 |
| 3.1 研究背景 | 第57-58页 |
| 3.2 实验部分 | 第58-61页 |
| 3.2.1 实验材料与药品 | 第58页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第58页 |
| 3.2.3 四段基因人工质粒的构建及DNA模板的制备 | 第58-59页 |
| 3.2.4 四段基因的体外转录RNA制备 | 第59-60页 |
| 3.2.5 LAMP及逆转录LAMP反应体系 | 第60页 |
| 3.2.6 四段基因的LAMP引物设计筛选 | 第60页 |
| 3.2.7 四组LAMP引物的敏感性分析 | 第60页 |
| 3.2.8 LAMP及逆转录LAMP常温储存试剂制备 | 第60页 |
| 3.2.9 微流控荧光LAMP检测 | 第60-61页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第61-66页 |
| 3.3.1 四段MERS-CoV序列的LAMP引物设计筛选 | 第61-62页 |
| 3.3.2 四段MERS-CoV的引物对于RNA的敏感性评价 | 第62-63页 |
| 3.3.3 基于Orfla区段引物的常温检测试剂效果评价 | 第63-65页 |
| 3.3.4 MERS-CoV多重微流控荧光LAMP检测系统的初步应用 | 第65-66页 |
| 3.4 本章小结 | 第66-67页 |
| 第4章 基于竞争性互补配对的核酸恒温扩增(CAMP)新方法 | 第67-83页 |
| 4.1 研究背景 | 第67页 |
| 4.2 实验部分 | 第67-72页 |
| 4.2.1 实验材料与药品 | 第67-68页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第68页 |
| 4.2.3 MERS-CoV的orf1a基因改造及CAMP引物设计 | 第68-69页 |
| 4.2.4 Mo1a基因的体外转录RNA制备 | 第69-70页 |
| 4.2.5 CAMP及其衍生反应体系 | 第70页 |
| 4.2.6 Mo1a基因的CAMP及衍生反应产物的限制性内切酶分析 | 第70-71页 |
| 4.2.7 琼脂糖凝胶电泳 | 第71页 |
| 4.2.8 Mo1a基因的CAMP反应灵敏度分析 | 第71-72页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第72-82页 |
| 4.3.1 CAMP反应体系与原理 | 第72-74页 |
| 4.3.2 CAMP引物设计推荐规则 | 第74页 |
| 4.3.3 CAMP对DNA扩增反应验证 | 第74-76页 |
| 4.3.4 逆转录CAMP对RNA扩增反应验证 | 第76页 |
| 4.3.5 CAMP反应中外引物及环引物的作用 | 第76-77页 |
| 4.3.6 CAMP及其衍生反应的产物分析 | 第77-78页 |
| 4.3.7 CAMP反应灵敏度测试 | 第78-80页 |
| 4.3.8 CAMP反应判定 | 第80-81页 |
| 4.3.9 CAMP与LAMP技术的比较 | 第81-82页 |
| 4.4 本章小结 | 第82-83页 |
| 第5章 CAMP反应体系优化 | 第83-99页 |
| 5.1 研究背景 | 第83页 |
| 5.2 实验部分 | 第83-85页 |
| 5.2.1 实验材料与药品 | 第83-84页 |
| 5.2.2 实验仪器 | 第84页 |
| 5.2.3 CAMP引物及模板 | 第84页 |
| 5.2.4 CAMP及其衍生反应体系 | 第84-85页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第85-96页 |
| 5.3.1 甜菜碱浓度优化 | 第85-86页 |
| 5.3.2 镁离子浓度的优化 | 第86-87页 |
| 5.3.3 甘油浓度的优化 | 第87-88页 |
| 5.3.4 聚乙二醇浓度的优化 | 第88-89页 |
| 5.3.5 二甲亚砜浓度的优化 | 第89-90页 |
| 5.3.6 甲酰胺浓度的优化 | 第90-91页 |
| 5.3.7 引物体系优化筛选 | 第91-93页 |
| 5.3.8 应用于CAMP的荧光染料筛选 | 第93-94页 |
| 5.3.9 Taqman探针应用于CAMP反应 | 第94-96页 |
| 5.4 本章小结 | 第96-99页 |
| 第6章 CAMP在甲型H1N1病毒检测中的应用 | 第99-111页 |
| 6.1 研究背景 | 第99-100页 |
| 6.2 实验部分 | 第100-104页 |
| 6.2.1 实验材料与药品 | 第100页 |
| 6.2.2 实验仪器 | 第100-101页 |
| 6.2.3 H1及N1基因改造及CAMP引物设计 | 第101-102页 |
| 6.2.4 H1和N1基因的体外转录RNA制备 | 第102-103页 |
| 6.2.5 标准CAMP及衍生反应 | 第103页 |
| 6.2.6 甲型流感病毒样本核酸提取及转录 | 第103-104页 |
| 6.2.7 H1和N1的CAMP引物敏感性分析 | 第104页 |
| 6.2.8 H1和N1的CAMP引物对于真实样本检测 | 第104页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第104-110页 |
| 6.3.1 H1及N1基因的CAMP引物筛选 | 第104-105页 |
| 6.3.2 H1及N1基因的CAMP加速引物筛选 | 第105-106页 |
| 6.3.3 H1及N1基因的CAMP引物的可视化检测 | 第106页 |
| 6.3.4 H1及N1基因DNA的CAMP检测敏感性 | 第106-107页 |
| 6.3.5 H1及N1基因RNA的CAMP检测敏感性测试 | 第107-108页 |
| 6.3.6 H1及N1基因CAMP引物的特异性验证 | 第108-109页 |
| 6.3.7 H1及N1基因CAMP检测的统计学分析 | 第109-110页 |
| 6.4 本章小结 | 第110-111页 |
| 第7章 CAMP在犬病毒检测中的应用 | 第111-121页 |
| 7.1 研究背景 | 第111-112页 |
| 7.2 实验部分 | 第112-116页 |
| 7.2.1 实验材料与药品 | 第112页 |
| 7.2.2 实验仪器 | 第112-113页 |
| 7.2.3 八种犬病毒CAMP引物设计筛选 | 第113-115页 |
| 7.2.4 犬病毒基因组提取 | 第115-116页 |
| 7.3 结果与讨论 | 第116-119页 |
| 7.3.1 八种犬感染病毒CAMP引物筛选 | 第116-117页 |
| 7.3.2 八种犬感染病毒基因的CAMP加速引物筛选 | 第117-118页 |
| 7.3.3 四种犬病毒实际检测 | 第118-119页 |
| 7.4 本章小结 | 第119-121页 |
| 第8章 针对CAMP技术的核酸快速提取 | 第121-127页 |
| 8.1 研究背景 | 第121页 |
| 8.2 实验部分 | 第121-124页 |
| 8.2.1 实验材料与药品 | 第121页 |
| 8.2.2 实验仪器 | 第121-122页 |
| 8.2.3 标准OL-CAMP反应及PCR反应 | 第122页 |
| 8.2.4 简易核酸提取装置及使用 | 第122-123页 |
| 8.2.5 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第123-124页 |
| 8.3 结果与讨论 | 第124-126页 |
| 8.3.1 碱浓度核酸提取的影响 | 第124页 |
| 8.3.2 细菌快速提取核酸CAMP反应评价 | 第124-125页 |
| 8.3.3 金黄色葡萄球菌提取效果评价 | 第125-126页 |
| 8.3.4 病毒提取效果评价 | 第126页 |
| 8.4 本章小结 | 第126-127页 |
| 第9章 基于微流控CAMP的鲤科鱼疱疹病毒现场检测 | 第127-137页 |
| 9.1 研究背景 | 第127-128页 |
| 9.2 实验部分 | 第128-131页 |
| 9.2.1 实验材料与药品 | 第128页 |
| 9.2.2 实验仪器 | 第128-129页 |
| 9.2.3 病鱼样本核酸提取 | 第129页 |
| 9.2.4 CyHV-2及CyHV-3的CAMP引物筛选及设计 | 第129-131页 |
| 9.2.5 标准CAMP及衍生反应 | 第131页 |
| 9.2.6 CyHV-2及CyHV-3的CAMP引物敏感性分析 | 第131页 |
| 9.2.7 CyHV-2及CyHV-3的微流控CAMP检测 | 第131页 |
| 9.3 结果与讨论 | 第131-135页 |
| 9.3.1 CyHV-2和CyHV-3的CAMP引物筛选 | 第131-132页 |
| 9.3.2 CyHV-2和CyHV-3的CAMP加速引物筛选 | 第132页 |
| 9.3.3 CyHV-2和CyHV-3的OL-CAMP引物敏感性 | 第132-133页 |
| 9.3.4 CyHV-2和CyHV-3的OL-CAMP微流控芯片检测 | 第133-135页 |
| 9.4 本章小结 | 第135-137页 |
| 第10章 基于螺旋环的核酸恒温扩增(HAMP)新方法 | 第137-149页 |
| 10.1 研究背景 | 第137页 |
| 10.2 实验部分 | 第137-141页 |
| 10.2.1 实验材料与药品 | 第137页 |
| 10.2.2 实验仪器 | 第137-138页 |
| 10.2.3 MERS-CoV orf1b的HAMP引物设计 | 第138-139页 |
| 10.2.4 Mo1b基因的体外转录RNA的制备 | 第139-140页 |
| 10.2.5 HAMP及其衍生反应体系 | 第140页 |
| 10.2.6 Mo1b基因的HAMP及衍生反应产物的限制性内切酶分析 | 第140页 |
| 10.2.7 琼脂糖凝胶电泳分析 | 第140-141页 |
| 10.2.8 Mo1b基因的HAMP反应灵敏度分析 | 第141页 |
| 10.3 结果与讨论 | 第141-148页 |
| 10.3.1 HAMP与PSR反应原理及比较 | 第141-143页 |
| 10.3.2 HAMP引物设计推荐规则 | 第143-144页 |
| 10.3.3 HAMP对DNA扩增反应验证 | 第144-145页 |
| 10.3.4 HAMP反应灵敏度测试 | 第145页 |
| 10.3.5 AHAMP反应灵敏度测试 | 第145-146页 |
| 10.3.6 RT-AHAMP反应灵敏度测试 | 第146-147页 |
| 10.3.7 HAMP及AHAMP的产物分析 | 第147-148页 |
| 10.3.8 AHAMP及RT-AHAMP的可视化检测 | 第148页 |
| 10.4 本章小结 | 第148-149页 |
| 第11章 结论与展望 | 第149-153页 |
| 11.1 主要结论 | 第149-150页 |
| 11.2 主要创新点 | 第150页 |
| 11.3 后期建议 | 第150-153页 |
| 参考文献 | 第153-169页 |
| 致谢 | 第169-171页 |
| 作者简历及攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第171页 |
