| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 前言 | 第12-15页 |
| 第一章 荧光定量RT-PCR检测紫杉醇耐药细胞SIRNA干扰前后TXR1 MRNA表达差异 | 第15-26页 |
| 1. 材料 | 第15-18页 |
| 1.1 细胞株及siRNA | 第15页 |
| 1.2 主要试剂与耗材 | 第15-17页 |
| 1.3 试验中所用部分培养基及试剂的配制 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-20页 |
| 2.1 不同程度的紫杉醇耐药细胞系(CNE-1/Taxo1)的细胞培养 | 第18-19页 |
| 2.2 六孔板细胞培养 | 第19-20页 |
| 3. 六孔板细胞转染(所有可能接触siRNA的尽可能无酶无菌) | 第20-21页 |
| 4. RT-PCR法检测mRNA含量 | 第21-23页 |
| 5. 数据分析 | 第23页 |
| 6. 结果 | 第23-26页 |
| 第二章 WESTERN BLOT检测紫杉醇耐药细胞SIRNA干扰前后TXR1蛋白表达差异 | 第26-32页 |
| 2.1 材料 | 第26-27页 |
| 2.1.1 细胞株及siRNA：参照1.1.1 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂及耗材(细胞培养试剂参照1.1.2) | 第26-27页 |
| 2.1.3 实验主要溶液配制 | 第27页 |
| 2.2 实验方法 | 第27-30页 |
| 2.2.1 细胞培养及六孔板细胞培养及转染步骤参照1.21,1.22,1.23 | 第27页 |
| 2.2.2 提取蛋白质 | 第27-28页 |
| 2.2.3 测定蛋白浓度(使用BCA试剂盒行蛋白浓度测定) | 第28页 |
| 2.2.4 SDS-PAGE凝胶电泳 | 第28-29页 |
| 2.2.5 转膜 | 第29页 |
| 2.2.6 封闭 | 第29页 |
| 2.2.7 一抗孵育 | 第29页 |
| 2.2.8 二抗孵育 | 第29-30页 |
| 2.2.9 ECL化学发光 | 第30页 |
| 2.2.10 PVDF膜的重复利用 | 第30页 |
| 2.2.11 统计学分析 | 第30页 |
| 2.3 结果 | 第30-32页 |
| 第三章 MTT法检测转染后三株鼻咽癌紫杉醇耐药细胞系耐药是否被逆转及正常鼻咽粘膜细胞生长状态 | 第32-39页 |
| 3.1 材料 | 第32页 |
| 3.1.1 细胞株及siRNA：参照1.1.1 | 第32页 |
| 3.1.2 主要试剂及耗材(细胞培养试剂参照1.1.2) | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-33页 |
| 3.2.1 细胞培养及六孔板细胞培养及转染步骤参照1.21,1.22,1.23 | 第32页 |
| 3.2.2 MTT法检测转然后细胞对紫杉醇耐药性 | 第32页 |
| 3.2.3 NP69细胞培养 | 第32-33页 |
| 3.2.4 NP69细胞及鼻咽癌亲本细胞CNE-1/亲加入SiRNA后用MTT法检测生长状态 | 第33页 |
| 3.2.5 统计分析 | 第33页 |
| 3.3 结果 | 第33-39页 |
| 第四章 荧光定量RT-PCR检测紫杉醇耐药细胞SIRNA干扰前后TSP1、CD47、DUSP1MRNA表达差异 | 第39-42页 |
| 4.1 材料 | 第39页 |
| 4.1.1 细胞株及siRNA：参照1.1.1 | 第39页 |
| 4.1.2 主要试剂及耗材(细胞培养及转染、PCR试剂参照1.1.2) | 第39页 |
| 4.2 实验方法 | 第39页 |
| 4.2.1 细胞培养及六孔板细胞培养转染及RT-PCR步骤参照 | 第39页 |
| 4.2.2 数据分析 | 第39页 |
| 4.3 结果 | 第39-42页 |
| 第五章 讨论 | 第42-49页 |
| 第六章 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-55页 |
| 综述 | 第55-64页 |
| 参考文献 | 第61-64页 |
