| 中文摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词说明 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 1.动脉粥样硬化研究现状 | 第11页 |
| 1.1 动脉粥样硬化流行病学研究及危害 | 第11页 |
| 2.动脉粥样硬化动物模型的制备方法 | 第11-16页 |
| 2.1 单一高脂饲料喂养法 | 第11-12页 |
| 2.2 联合型饲料喂养法 | 第12-13页 |
| 2.3 机械损伤法 | 第13-14页 |
| 2.4 炎症免疫法 | 第14-15页 |
| 2.5 血液流速改变法 | 第15-16页 |
| 2.6 基因工程法 | 第16页 |
| 3.LDLR基因研究概述 | 第16-17页 |
| 3.1 LDLR基因的概述 | 第16-17页 |
| 3.2 LDLR受体基因的功能 | 第17页 |
| 4.在各个动物方面动脉粥样硬化的研究进展 | 第17-20页 |
| 4.1 猪 | 第17-18页 |
| 4.2 犬 | 第18页 |
| 4.3 鼠 | 第18页 |
| 4.4 禽 | 第18页 |
| 4.5 人 | 第18-19页 |
| 4.6 兔 | 第19-20页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9质粒构建 | 第20-32页 |
| 1.材料和试剂 | 第20-21页 |
| 1.1 仪器和器材 | 第20页 |
| 1.2 主要试剂 | 第20页 |
| 1.3 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 1.4 所用软件 | 第21页 |
| 2.实验方法 | 第21-25页 |
| 2.1 LDLR基因的查阅及检索 | 第21页 |
| 2.2 LDLR基因敲除位点的选择和sgRNA的设计 | 第21-22页 |
| 2.3 CRISPR/Cas9二合一质粒构建及鉴定 | 第22-25页 |
| 3.体外转录 | 第25-28页 |
| 3.1 sgRNA和cas9转录模板的制备 | 第25-26页 |
| 3.2 转录模板的纯化与回收 | 第26-27页 |
| 3.3 sgRNA的体外转录与纯化 | 第27-28页 |
| 3.4 Cas9的体外转录与纯化 | 第28页 |
| 4.结果 | 第28-30页 |
| 4.1 LDLR基因敲除位点设计 | 第28页 |
| 4.2 引物设计和合成 | 第28-30页 |
| 4.4 CRISPR/Cas9质粒构建及鉴定 | 第30页 |
| 5.讨论 | 第30-32页 |
| 第三章 LDLR~(-/-)基因敲除兔的制备 | 第32-50页 |
| 1.实验材料 | 第32-33页 |
| 1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.2 主要仪器 | 第32页 |
| 1.3 主要器材 | 第32页 |
| 1.4 主要试剂和药品 | 第32-33页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第33页 |
| 2.实验方法 | 第33-36页 |
| 2.1 超数排卵 | 第33-34页 |
| 2.2 同期发情 | 第34页 |
| 2.3 受精卵的回收 | 第34-35页 |
| 2.4 胚胎显微注射 | 第35-36页 |
| 2.5 胚胎移植 | 第36页 |
| 2.6 分娩与护理 | 第36页 |
| 3.兔LDLR基因突变检测 | 第36-39页 |
| 3.1 兔基因组的提取 | 第36-37页 |
| 3.2 仔兔PCR检测与测序 | 第37-38页 |
| 3.3 仔兔基因组PCR扩增产物TA克隆 | 第38-39页 |
| 4.脱靶预测及检测 | 第39页 |
| 5.结果 | 第39-49页 |
| 5.1 超数排卵及受体兔妊娠分娩情况 | 第39页 |
| 5.2 仔兔基因组PCR检测 | 第39-40页 |
| 5.3 仔兔LDLR基因级PCR产物TA克隆及测序结果 | 第40-46页 |
| 5.4 off-target检测结果 | 第46-49页 |
| 6.讨论 | 第49-50页 |
| 第四章 LDLR~(-/-)模型评价动脉粥样硬化研究 | 第50-64页 |
| 1.实验材料 | 第50-52页 |
| 1.1 主要试验试剂和用品 | 第50页 |
| 1.2 主要试验仪器 | 第50页 |
| 1.3 主要试剂配制 | 第50-52页 |
| 2.方法与步骤 | 第52-55页 |
| 2.1 血清生化指标方法 | 第52页 |
| 2.2 LDLR基因突变兔血清电泳 | 第52-53页 |
| 2.3 LDLR基因突变兔血清Western blot | 第53页 |
| 2.4 苏丹红ⅳ观察LDLR基因突变兔脂质蓄积 | 第53页 |
| 2.5 石蜡切片的制作方法与步骤 | 第53-55页 |
| 2.6 巨噬细胞免疫组化 | 第55页 |
| 3.模型结果与分析 | 第55-62页 |
| 3.1 血清生化指标 | 第55-57页 |
| 3.2 LDLR基因突变兔血清的SDS-PAGE电泳 | 第57-58页 |
| 3.3 血清western blot | 第58-59页 |
| 3.4 苏丹红Ⅳ脂质蓄积 | 第59-60页 |
| 3.5 主动脉的石蜡切片 | 第60页 |
| 3.6 免疫组化主动脉中巨噬细胞的含量 | 第60-62页 |
| 4.讨论 | 第62-64页 |
| 全文总结 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 附录 | 第71-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
