| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 第1章 绪论 | 第8-18页 |
| 1.1 课题背景及研究的目的和意义 | 第8页 |
| 1.2 国内外研究现状及分析 | 第8-16页 |
| 1.2.1 MAEVELD1 简介 | 第8-10页 |
| 1.2.2 RCC1 简介 | 第10-12页 |
| 1.2.3 RanGTP 系统简介 | 第12-15页 |
| 1.2.4 本课题的研究假设 | 第15-16页 |
| 1.3 主要研究内容 | 第16-18页 |
| 第2章 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 细胞系、载体及菌株 | 第18页 |
| 2.1.2 用品与工具 | 第18-20页 |
| 2.2 pGEX-6P-1/RanBP1 重组体构建系列方法 | 第20-25页 |
| 2.2.1 获取目的片段的酶切反应体系 | 第20-21页 |
| 2.2.2 采用 Axygen 试剂盒胶回收 | 第21-22页 |
| 2.2.3 酶切产物的连接 | 第22页 |
| 2.2.4 转化 | 第22页 |
| 2.2.5 菌液 PCR 鉴定 | 第22-23页 |
| 2.2.6 质粒提取 | 第23-24页 |
| 2.2.7 重组质粒测序 | 第24-25页 |
| 2.2.8 菌体保存 | 第25页 |
| 2.3 GST 融合蛋白诱导表达 | 第25页 |
| 2.4 细胞培养及处理 | 第25-27页 |
| 2.4.1 细胞传代 | 第25-26页 |
| 2.4.2 细胞转染 | 第26-27页 |
| 2.4.3 细胞蛋白获取 | 第27页 |
| 2.5 Western Blot 印记杂交 | 第27-29页 |
| 2.6 免疫荧光共定位实验 | 第29-30页 |
| 2.7 免疫共沉淀 | 第30页 |
| 2.8 GST-pull down | 第30-32页 |
| 第3章 MARVELD1 与 RCC1 和 Ran 共定位及相互作用分析 | 第32-46页 |
| 3.1 MARVELD1 与 RCC1 和 Ran 共定位分析 | 第32-34页 |
| 3.2 MARVELD1-RCC1 截短体与 RCC1 和 Ran 共定位分析 | 第34-38页 |
| 3.2.1 MARVELD1 截短体酶切鉴定及表达分析 | 第34-35页 |
| 3.2.2 MARVELD1-RCC1 与 RCC1 共定位分析 | 第35-36页 |
| 3.2.3 MARVELD1-RCC1 与 Ran 共定位分析 | 第36-38页 |
| 3.3 Co-IP 检测 MARVELD1 与 RCC1 和 Ran 相互作用 | 第38-39页 |
| 3.3.1 MARVELD1 与 Ran 免疫共沉淀 | 第38-39页 |
| 3.3.2 MARVELD1 与 RCC1 免疫共沉淀 | 第39页 |
| 3.4 GST-RanBP1 重组体构建及诱导表达 | 第39-43页 |
| 3.4.1 pGEX-6P-1-RanBP1 重组体构建 | 第39-41页 |
| 3.4.2 pGEX-6P-1-RanBP1 重组体测序 | 第41页 |
| 3.4.3 重组子质粒转化 BL21 及诱导表达 | 第41-43页 |
| 3.5 GST-pull down 验证 MARVELD1 与 RanGTP 相互作用 | 第43页 |
| 3.6 本章讨论 | 第43-45页 |
| 3.7 本章小结 | 第45-46页 |
| 第4章 MARVELD1 调控 RCC1 表达参与染色质凝集和细胞有丝分裂 | 第46-55页 |
| 4.1 MARVELD1 表达与 RCC1 和 Ran 表达的关系 | 第46-49页 |
| 4.1.1 RCC1 和 Ran 表达分析 | 第46-47页 |
| 4.1.2 MARVELD1 表达沉默对 RCC1 和 Ran 表达影响 | 第47-48页 |
| 4.1.3 过表达 MARVELD1 对 RCC1 和 Ran 表达影响 | 第48-49页 |
| 4.2 MARVELD1 的表达影响染色质凝集的研究 | 第49-52页 |
| 4.2.1 shRNA 干扰 RCC1 和 Ran 效率分析 | 第49-50页 |
| 4.2.2 shRNA 干扰后 DAPI 染色分析 | 第50-51页 |
| 4.2.3 MARVELD1 与染色质凝集关系的研究 | 第51-52页 |
| 4.3 本章讨论 | 第52-53页 |
| 4.4 本章小结 | 第53-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62页 |
