| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-8页 |
| 1 引言 | 第12-21页 |
| 1.1 Hr基因的相关研究 | 第12-14页 |
| 1.2 基因功能的研究方法 | 第14-17页 |
| 1.2.1 基因的生物信息学分析 | 第14页 |
| 1.2.2 新基因的蛋白质功能域分析 | 第14页 |
| 1.2.3 新基因的体内表达规律分析 | 第14-15页 |
| 1.2.4 基因功能的实验学验证 | 第15-17页 |
| 1.3 差异蛋白组学 | 第17-19页 |
| 1.3.1 双向电泳技术(2-DE) | 第18页 |
| 1.3.2 生物质谱技术(MS) | 第18-19页 |
| 1.3.3 生物信息学分析 | 第19页 |
| 1.4 本课题的主要研究内容及意义 | 第19-21页 |
| 2 Hr基因过表达载体和siRNA的构建及表达效果验证 | 第21-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-24页 |
| 2.1.1 实验载体及细胞 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第23-24页 |
| 2.2 试验方法 | 第24-37页 |
| 2.2.1 目的基因CDS区域调取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 双酶切及产物回收 | 第25-27页 |
| 2.2.3 回收的线性化载体与目的基因连接 | 第27-28页 |
| 2.2.4 转化摇菌 | 第28页 |
| 2.2.5 菌落PCR鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.6 质粒提取和酶切鉴定 | 第29-30页 |
| 2.2.7 测序 | 第30-31页 |
| 2.2.8 细胞培养 | 第31-32页 |
| 2.2.9 siRNA、Hr基因过表达载体转染NIH3T3细胞 | 第32页 |
| 2.2.10 细胞免疫组化检测转染组HR蛋白表达效果 | 第32-33页 |
| 2.2.11 WesternBlot检测HR蛋白的表达量 | 第33-35页 |
| 2.2.12 流式细胞仪测转染细胞周期和凋亡 | 第35页 |
| 2.2.13 qRT-PCR检测Hr相对表达量 | 第35-37页 |
| 2.2.14 统计分析 | 第37页 |
| 2.3 结果 | 第37-52页 |
| 2.3.1 Hr扩增结果 | 第37页 |
| 2.3.2 载体线性化结果 | 第37-38页 |
| 2.3.3 菌落PCR检测pEGFP-Hr克隆产物结果 | 第38-39页 |
| 2.3.4 pEGFP-Hr-M和pEGFP-Hr-N双酶切鉴定结果 | 第39页 |
| 2.3.5 重组质粒测序结果 | 第39-40页 |
| 2.3.6 荧光显微镜观察转染细胞结果 | 第40-41页 |
| 2.3.7 流式细胞仪检测过表达组转染效率结果 | 第41-42页 |
| 2.3.8 免疫组化检测不同过表达组HR表达结果 | 第42-43页 |
| 2.3.9 WesternBlot检测过表达组细胞HR表达结果 | 第43-45页 |
| 2.3.10 流式细胞仪检测Hr过表达组细胞凋亡结果 | 第45-46页 |
| 2.3.11 CCK-8检测细胞增殖结果 | 第46-47页 |
| 2.3.12 qRT-PCR检测RNA干扰组Hr表达结果 | 第47-48页 |
| 2.3.13 WesternBlot检测RNA干扰组HR蛋白表达量结果 | 第48-49页 |
| 2.3.14 流式检测RNA干扰各组细胞周期及凋亡结果 | 第49-51页 |
| 2.3.15 检测RNA干扰各组细胞增殖结果 | 第51-52页 |
| 2.4 讨论 | 第52-53页 |
| 2.5 小结 | 第53-54页 |
| 3 差异蛋白筛选及验证 | 第54-85页 |
| 3.1 实验材料 | 第54-56页 |
| 3.1.1 实验动物 | 第54页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第54-55页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第55页 |
| 3.1.4 主要试剂配制 | 第55-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-63页 |
| 3.2.1 双向电泳 | 第56-60页 |
| 3.2.2 质谱鉴定 | 第60-62页 |
| 3.2.3 WesternBlot验证部分差异蛋白表达量 | 第62-63页 |
| 3.3 结果 | 第63-82页 |
| 3.3.1 蛋白定量结果 | 第63-64页 |
| 3.3.2 双向电泳实验图谱 | 第64-70页 |
| 3.3.3 质谱分析差异表达蛋白点结果 | 第70-75页 |
| 3.3.4 差异蛋白的鉴定分析 | 第75-77页 |
| 3.3.5 差异蛋白质的GO分析结果 | 第77-79页 |
| 3.3.6 差异基因的KEGG通路分析 | 第79-80页 |
| 3.3.7 差异蛋白表达验证结果 | 第80-82页 |
| 3.4 讨论 | 第82-84页 |
| 3.5 小结 | 第84-85页 |
| 4 结论 | 第85-86页 |
| 参考文献 | 第86-90页 |
| 致谢 | 第90-91页 |
| 个人简历 | 第91页 |
| 参与课题 | 第91页 |
| 硕士期间发表文章 | 第91页 |
