| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 中英文缩略表 | 第18-19页 |
| 1 引言 | 第19-21页 |
| 2 实验材料与方法 | 第21-61页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-31页 |
| 2.1.1 研究对象 | 第21页 |
| 2.1.2 细胞系与菌株来源 | 第21页 |
| 2.1.3 质粒 | 第21-23页 |
| 2.1.4 引物 | 第23页 |
| 2.1.5 主要试剂 | 第23-26页 |
| 2.1.6 主要仪器设备 | 第26-28页 |
| 2.1.7 常用试剂的配制 | 第28-31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-59页 |
| 2.2.1 检测组织标本中lncRNAXLOC_005950、PFKMmRNA表达水平 | 第31-33页 |
| 2.2.2 检测成骨细胞系hFOB1.19和骨肉瘤细胞系MG63中lncRNAXLOC_005950、PFKMmRNA的表达水平 | 第33-36页 |
| 2.2.3 PX459重组质粒的制备 | 第36-41页 |
| 2.2.4 构建lncRNAXLOC_005950基因编辑的骨肉瘤细胞MG63-/- | 第41-44页 |
| 2.2.5 基因编辑后细胞中PFKMmRNA的表达 | 第44页 |
| 2.2.6 细胞中PFKM活性检测 | 第44-45页 |
| 2.2.7 细胞中葡萄糖含量检测 | 第45-46页 |
| 2.2.8 细胞中乳酸含量测定 | 第46-47页 |
| 2.2.9 CCK-8检测细胞活性 | 第47-48页 |
| 2.2.10 AnnexinⅤ/PI双荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 2.2.11 WesternBlotting检测细胞中PFKM蛋白的表达 | 第49-52页 |
| 2.2.12 生物信息学分析 | 第52页 |
| 2.2.13 检测组织标本中hsa-miRNA-542-3p的表达水平 | 第52-53页 |
| 2.2.14 检测成骨细胞系hFOB1.19、骨肉瘤细胞系MG63及MG63-/-中hsa-miR-542-3p的表达水平 | 第53-54页 |
| 2.2.15 细胞转染并检测转染效率 | 第54页 |
| 2.2.16 检测转染后的PFKMmRNA的表达 | 第54页 |
| 2.2.17 转染后细胞中PFKM活性检测 | 第54页 |
| 2.2.18 转染后细胞中葡萄糖含量检测 | 第54-55页 |
| 2.2.19 转染后细胞中乳酸含量测定 | 第55页 |
| 2.2.20 转染后CCK-8检测细胞活性 | 第55页 |
| 2.2.21 AnnexinⅤ/PI双荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡 | 第55页 |
| 2.2.22 WesternBlotting检测细胞中PFKM蛋白的表达 | 第55页 |
| 2.2.23 双荧光素酶实验 | 第55-59页 |
| 2.3 统计学分析 | 第59-61页 |
| 3 实验结果 | 第61-77页 |
| 3.1 组织标本中lncRNAXLOC_005950及PFKMmRNA表达水平 | 第61-62页 |
| 3.2 成骨细胞系hFOB1.19和骨肉瘤细胞系MG63中lncRNAXLOC_005950及PFKMmRNA的表达水平 | 第62-63页 |
| 3.3 PX459重组质粒的制备 | 第63-64页 |
| 3.4 构建lncRNAXLOC_005950基因编辑的骨肉瘤细胞MG63-/- | 第64页 |
| 3.5 基因编辑后MG63~(-/-)细胞中PFKMmRNA的表达变化与PFKM活性检测 | 第64-65页 |
| 3.6 细胞中葡萄糖含量与乳酸含量检测 | 第65-66页 |
| 3.7 CCK-8检测细胞活性 | 第66-67页 |
| 3.8 AnnexinⅤ/PI双荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡 | 第67-68页 |
| 3.9 WesternBlotting检测细胞中PFKM蛋白的表达 | 第68页 |
| 3.10 生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 3.11 检测组织标本中hsa-miRNA-542-3p的表达水平。 | 第69页 |
| 3.12 检测成骨细胞系hFOB1.19、骨肉瘤细胞系MG63及MG63~(-/-)中hsa-miR-542-3p的表达水平 | 第69-70页 |
| 3.13 MG63细胞转染hsa-miR-542-3p并检测转染效率 | 第70-71页 |
| 3.14 检测MG63细胞转染hsa-miR-542-3p后PFKMmRNA表达与PFKM活性变化 | 第71-72页 |
| 3.15 MG63细胞转染hsa-miR-542-3p后细胞中葡萄糖含量与乳酸含量检测 | 第72-73页 |
| 3.16 MG63细胞转染hsa-miR-542-3p后CCK-8检测细胞活性 | 第73页 |
| 3.17 MG63细胞转染hsa-miR-542-3p后AnnexinⅤ/PI双荧光标记流式细胞术检测细胞凋亡 | 第73-74页 |
| 3.18 MG63细胞转染hsa-miR-542-3p后WesternBlotting检测细胞中PFKM蛋白的表达 | 第74-75页 |
| 3.19 双荧光素酶实验 | 第75-77页 |
| 4 讨论 | 第77-81页 |
| 5 结论 | 第81-82页 |
| 6 参考文献 | 第82-87页 |
| 综述 | 第87-101页 |
| 参考文献 | 第95-101页 |
| 个人简历 | 第101-102页 |
| 致谢 | 第102页 |
