| 摘要 | 第4-9页 |
| abstract | 第9-14页 |
| 中英文缩略词表 | 第18-19页 |
| 引言 | 第19-22页 |
| 第一部分 人肝组织中ASPM的表达水平及临床病理学意义研究 | 第22-47页 |
| 前言 | 第22-23页 |
| 1 主要材料及仪器 | 第23-24页 |
| 1.1 组织RNA提取、反转录及qPCR的试剂和仪器 | 第23页 |
| 1.2 组织Western Blotting试剂和仪器 | 第23页 |
| 1.3 免疫组化试剂及仪器 | 第23-24页 |
| 2 实验方法 | 第24-33页 |
| 2.1 肝癌病人癌组织及癌旁组织标本库建立 | 第24页 |
| 2.2 RT-qPCR | 第24-27页 |
| 2.2.1 总RNA的提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 cDNA的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 实时荧光定量PCR | 第26-27页 |
| 2.3 Western Blotting | 第27-31页 |
| 2.3.1 组织中总蛋白的提取 | 第28-29页 |
| 2.3.2 BCA法测总蛋白的浓度 | 第29-30页 |
| 2.3.3 煮蛋白 | 第30页 |
| 2.3.4 配制SDS-PAGE胶 | 第30页 |
| 2.3.5 上样、电泳及转膜 | 第30-31页 |
| 2.3.6 封闭及抗体孵育 | 第31页 |
| 2.3.7 ECL显影 | 第31页 |
| 2.4 免疫组化 | 第31-32页 |
| 2.5 统计方法 | 第32-33页 |
| 3 结果 | 第33-44页 |
| 3.1 人肝标本的基本信息 | 第33-34页 |
| 3.2 肝癌组织中ASPM的表达上调及临床病理学分析 | 第34-42页 |
| 3.2.1 人肝组织中ASPM mRNA的表达水平及临床病理学意义 | 第34-37页 |
| 3.2.2 不同种类的肝癌患者组织ASPM mRNA的表达水平及意义 | 第37-40页 |
| 3.2.3 HBV-HCC ASPM mRNA的表达水平及临床病理学意义 | 第40-42页 |
| 3.3 肝癌组织中ASPM的蛋白表达水平显著高于癌旁组织 | 第42-43页 |
| 3.4 ASPM与Wnt/β-catenin信号通路上4个重要开关分子mRNA水平的相关性 | 第43-44页 |
| 4 讨论 | 第44-46页 |
| 5 结论 | 第46-47页 |
| 第二部分 ASPM对肝癌细胞恶性生物学特性及Wnt/β-catenin信号通路的影响 | 第47-66页 |
| 前言 | 第47-48页 |
| 1 实验材料及仪器 | 第48-49页 |
| 1.1 细胞培养试剂及仪器 | 第48页 |
| 1.2 慢病毒包装主要试剂及仪器 | 第48-49页 |
| 1.3 RT-qPCR主要试剂及仪器 | 第49页 |
| 1.4 Western Blotting主要试剂及仪器 | 第49页 |
| 1.5 细胞功能试验主要试剂及仪器 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-57页 |
| 2.1 细胞培养 | 第49-51页 |
| 2.2 质粒的扩增 | 第51-54页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5α感受态的制备 | 第51-52页 |
| 2.2.2 转化、大肠杆菌的扩增 | 第52-53页 |
| 2.2.3 质粒的提取及鉴定 | 第53-54页 |
| 2.3 制备慢病毒 | 第54-55页 |
| 2.3.1 质粒转染HEK-293T细胞 | 第54-55页 |
| 2.3.2 收集、浓缩慢病毒 | 第55页 |
| 2.4 慢病毒感染细胞和稳定细胞系筛选 | 第55-56页 |
| 2.5 细胞功能试验 | 第56-57页 |
| 2.5.1 划痕实验 | 第56页 |
| 2.5.2 Transwell细胞侵袭实验 | 第56-57页 |
| 2.5.3 CCK-8细胞增殖实验 | 第57页 |
| 3 实验结果 | 第57-63页 |
| 3.1 慢病毒稳定干扰ASPM肝癌细胞株的成功构建 | 第57-58页 |
| 3.2 Western blotting检测慢病毒稳定干扰后ASPM的蛋白表达水平 | 第58-59页 |
| 3.3 CCK-8増殖实验、划痕实验、transwell实验检测细胞增殖、迁移、侵袭能力 | 第59-62页 |
| 3.3.1 HepG2细胞体外增殖、迁移、侵袭能力的检测 | 第59-61页 |
| 3.3.2 SMMC-7721细胞体外增殖、迁移、侵袭能力的检测 | 第61-62页 |
| 3.4 ASPM对Wnt/β-catenin信号通路上的4个开关分子的影响 | 第62-63页 |
| 4 讨论 | 第63-65页 |
| 5 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 综述 肝癌细胞的起源及Wnt信号通路在肿瘤中的作用机制 | 第70-83页 |
| 1 肝癌细胞的起源 | 第70-73页 |
| 1.1 祖细胞作为前体细胞 | 第71-72页 |
| 1.2 成人肝细胞作为起源细胞 | 第72-73页 |
| 2 Wnt信号通路在肿瘤中的作用机制 | 第73-77页 |
| 2.1 Wnt信号通路的组成 | 第73-74页 |
| 2.2 Wnt信号通路在肿瘤中作用机制的研究 | 第74-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 个人简历 | 第83-84页 |
| 致谢 | 第84页 |
