中文摘要 | 第4-7页 |
英文摘要 | 第7-10页 |
英文缩略词表 | 第14-15页 |
引言 | 第15-17页 |
1 实验材料 | 第17-20页 |
1.1 实验动物、细胞株、质粒 | 第17页 |
1.2 实验用药 | 第17页 |
1.3 主要试剂 | 第17-18页 |
1.4 主要试剂的配制 | 第18-19页 |
1.5 主要实验仪器 | 第19-20页 |
2 实验方法 | 第20-34页 |
2.1 小鼠心肌肥大模型的建立 | 第20页 |
2.1.1 小鼠心肌肥大模型的建立 | 第20页 |
2.1.2 实验分组 | 第20页 |
2.2 超声心动图监测 | 第20-21页 |
2.3 心脏灌流固定 | 第21页 |
2.4 免疫组织化学 | 第21-22页 |
2.5 小鼠心室组织总RNA的提取 | 第22-23页 |
2.6 Oligo dT引物反转录 | 第23-24页 |
2.7 茎环引物法反转录 | 第24-26页 |
2.8 Real-time PCR | 第26-27页 |
2.9 细胞培养 | 第27-29页 |
2.9.1 P19CL6及NIH3T3(ATCC)细胞培养 | 第27-28页 |
2.9.2 新生SD大鼠原代心肌细胞的分离和培养 | 第28-29页 |
2.10 PPARδ3’-UTR荧光素酶报告基因重组质粒的构建 | 第29-32页 |
2.10.1 PCR扩增目的基因片段 | 第29-30页 |
2.10.2 PCR产物胶回收 | 第30页 |
2.10.3 PCR产物及载体双酶切 | 第30-31页 |
2.10.4 双酶切产物胶回收 | 第31页 |
2.10.5 目的基因与载体的连接 | 第31页 |
2.10.6 连接产物转化 | 第31-32页 |
2.10.7 小提质粒 | 第32页 |
2.10.8 重组质粒鉴定 | 第32页 |
2.10.9 大提重组质粒 | 第32页 |
2.11 脂质体转染 | 第32-33页 |
2.12 荧光素酶活性测定 | 第33页 |
2.13 细胞总RNA的提取及反转录 | 第33页 |
2.14 统计学分析 | 第33-34页 |
3 实验结果 | 第34-48页 |
3.1 miR-29a缓解盐酸异丙肾上腺素诱导的心肌肥大 | 第34-40页 |
3.1.1 盐酸异丙肾上腺素诱导的心肌肥大发生时,miR-29a 对心脏形态的影响 | 第34-36页 |
3.1.2 盐酸异丙肾上腺素诱导心肌肥大发生时,miR-29a对心功能的影响 | 第36-38页 |
3.1.3 盐酸异丙肾上腺素诱导心肌肥大发生时,miR-29a 对心肌肥大相关基因的表达水平的影响 | 第38-40页 |
3.2 miR-29a可维持心功能并下调ANF的表达 | 第40-44页 |
3.2.1 miR-29a对心脏正常形态的影响 | 第40-42页 |
3.2.2 miR-29a可以维持心脏功能 | 第42-43页 |
3.2.3 miR-29a下调ANF的表达 | 第43-44页 |
3.3 miR-29a靶向PPARδ抑制ANF的表达 | 第44-48页 |
3.3.1 miR-29a下调PPARδ表达 | 第44-45页 |
3.3.2 miR-29a靶向PPARδ3'-UTR | 第45-46页 |
3.3.3 PPARδ对ANF启动子活性的影响 | 第46-48页 |
4 讨论 | 第48-51页 |
5 结论和意义 | 第51-52页 |
5.1 结论 | 第51页 |
5.2 意义 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-54页 |
6 综述 miRNAs在心肌肥大中的作用 | 第54-72页 |
参考文献 | 第63-72页 |
个人简历 | 第72-73页 |
致谢 | 第73页 |