| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 中英文缩略词表 | 第13-14页 |
| 第1章 引言 | 第14-16页 |
| 第2章 质粒的鉴定、扩增及浓度测定 | 第16-23页 |
| 1 材料 | 第16-17页 |
| 1.1 菌株 | 第16页 |
| 1.2 质粒载体 | 第16页 |
| 1.3 主要试剂 | 第16页 |
| 1.4 主要仪器 | 第16-17页 |
| 2 方法 | 第17-21页 |
| 2.1 溶液配制 | 第17-18页 |
| 2.2 转化 | 第18页 |
| 2.3 扩增 | 第18页 |
| 2.4 质粒提取(小提) | 第18-19页 |
| 2.5 质粒双酶切鉴定 | 第19-20页 |
| 2.6 质粒的大量制备、纯化和定量 | 第20-21页 |
| 3 结果 | 第21-22页 |
| 3.1 p-EGFP-MST1及p-EGFP-N1质粒载体的双酶切结果 | 第21页 |
| 3.2 质粒DNA的定量结果 | 第21-22页 |
| 4 小结 | 第22-23页 |
| 第3章 MST1对人结直肠癌细胞SW480的作用的体外实验研究 | 第23-61页 |
| 1 材料 | 第23-25页 |
| 1.1 细胞 | 第23页 |
| 1.2 主要仪器 | 第23页 |
| 1.3 主要试剂 | 第23-25页 |
| 2 方法 | 第25-36页 |
| 2.1 溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.2 si RNA的设计与合成 | 第26-27页 |
| 2.3 细胞培养 | 第27页 |
| 2.4 si RNA片段筛选的实验分组 | 第27-28页 |
| 2.5 不同浓度 5-FU对SW480细胞增殖及MST1等蛋白影响的实验分组 | 第28页 |
| 2.6 MST1对SW480细胞增殖和凋亡的影响的研究的实验分组 | 第28-29页 |
| 2.7 转染 | 第29页 |
| 2.8 MTS比色法检测SW480细胞增殖活性 | 第29-30页 |
| 2.9 流式细胞术检测SW480细胞凋亡率 | 第30页 |
| 2.10 Hoechst 33342染色观察SW480细胞凋亡形态 | 第30页 |
| 2.11 RT-qPCR检测SW480细胞MST1、yap、puma及caspase3等基因mRNA的表达 | 第30-33页 |
| 2.12 Western Blot分析各组SW480细胞中MST1、YAP等蛋白的表达202.13统计学处理 | 第33-36页 |
| 3 结果 | 第36-57页 |
| 3.1 质粒和RNA干扰片段的转染效果 | 第36-38页 |
| 3.2 总RNA的浓度、纯度和质量 | 第38页 |
| 3.3 si RNA片段的筛选 | 第38-40页 |
| 3.4 提高 5-FU浓度和处理时间可提升其对SW480细胞的增殖抑制率 | 第40-41页 |
| 3.5 MST1 高表达对 SW480 细胞增殖与凋亡的影响 | 第41-45页 |
| 3.6 MST1高表达对YAP磷酸化及p73、p53、PUMA及caspase3蛋白表达的影响 | 第45-49页 |
| 3.7 MST1高表达与 5-FU诱导细胞凋亡的关系 | 第49-50页 |
| 3.8 沉默MST1对SW480细胞增殖与凋亡的影响 | 第50-54页 |
| 3.9 沉默MST1对p73、p53、PUMA及caspase3蛋白表达及YAP磷酸化的影响 | 第54-57页 |
| 4 讨论 | 第57-61页 |
| 4.1 MST1对细胞的促凋亡和抑增殖作用 | 第57-58页 |
| 4.2 肿瘤细胞治疗中MST1和 5-FU之间的关系 | 第58-59页 |
| 4.3 MST1对细胞增殖和凋亡影响的机制 | 第59-61页 |
| 第4章 MST1对人结直肠癌细胞SW480的裸鼠移植瘤的影响的实验 | 第61-69页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| 1.1 细胞 | 第61页 |
| 1.2 动物 | 第61页 |
| 1.3 主要仪器 | 第61页 |
| 1.4 主要试剂 | 第61-62页 |
| 2 方法 | 第62-63页 |
| 2.1 SW480细胞的准备及裸鼠的饲养 | 第62页 |
| 2.2 MST1治疗裸鼠移植瘤实验 | 第62页 |
| 2.3 免疫组织化学分析肿瘤内MST1、Phospho-YAP1（Ser127）及PUMA蛋白表达 | 第62-63页 |
| 2.4 统计学处理 | 第63页 |
| 3 结果 | 第63-67页 |
| 3.1 MST1治疗裸鼠移植瘤的实验结果 | 第63-64页 |
| 3.2 裸鼠移植瘤中MST1、Phospho-YAP1(Ser127)及PUMA蛋白表达514 讨论 | 第64-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 第5章 结论与展望 | 第69-70页 |
| 5.1 结论 | 第69页 |
| 5.2 进一步工作的方向 | 第69-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-75页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第75-76页 |
| 综述 | 第76-85页 |
| 参考文献 | 第82-85页 |
