| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 前言 | 第12-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 1.1 瘤胃产甲烷菌 | 第13-15页 |
| 1.1.1 甲烷菌的分类及研究方法 | 第13-14页 |
| 1.1.2 瘤胃中的优势产甲烷菌 | 第14-15页 |
| 1.1.3 反刍兽甲烷短杆菌(Mbr. ruminantium) | 第15页 |
| 1.2 瘤胃甲烷生成及调控措施 | 第15-19页 |
| 1.2.1 甲烷生成途径 | 第15-17页 |
| 1.2.2 调控措施 | 第17-19页 |
| 1.3 辅酶F_(420)的功能与生物合成 | 第19-22页 |
| 1.3.1 辅酶F_(420)的结构与功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2 辅酶F_(420)的生物合成 | 第20-21页 |
| 1.3.3 2-磷酸-L-乳酸转移酶(CofD) | 第21-22页 |
| 1.4 基因敲除概述 | 第22-23页 |
| 1.4.1 基因敲除的原理与方法 | 第22-23页 |
| 1.4.2 基因敲除在生物学功能学研究中的应用 | 第23页 |
| 1.5 存在的问题 | 第23-24页 |
| 1.6 试验目的和意义 | 第24-25页 |
| 1.6.1 目的 | 第24页 |
| 1.6.2 意义 | 第24页 |
| 1.6.3 主要内容 | 第24-25页 |
| 第二章 试验研究 | 第25-55页 |
| 试验一 反刍兽甲烷短杆菌的分离鉴定 | 第25-36页 |
| 1.1 材料和方法 | 第25-31页 |
| 1.1.1 培养基成分及配制 | 第25-26页 |
| 1.1.2 甲烷菌的分离 | 第26-27页 |
| 1.1.3 产甲烷菌的菌落鉴定 | 第27-29页 |
| 1.1.4 生长曲线的绘制 | 第29-30页 |
| 1.1.5 产甲烷菌的保种 | 第30-31页 |
| 1.1.6 数据统计分析 | 第31页 |
| 1.2 结果与分析 | 第31-35页 |
| 1.2.1 菌株的表型观察 | 第31-32页 |
| 1.2.2 菌株的系统分类学鉴定 | 第32-34页 |
| 1.2.3 菌株的生长规律 | 第34-35页 |
| 1.3 讨论 | 第35页 |
| 1.4 小结 | 第35-36页 |
| 试验二 反刍兽甲烷短杆菌cofD基因敲除体的构建及验证 | 第36-48页 |
| 2.1 材料和方法 | 第36-43页 |
| 2.1.1 菌种来源及质粒 | 第36页 |
| 2.1.2 扩增引物 | 第36页 |
| 2.1.3 主要试剂与仪器设备 | 第36-37页 |
| 2.1.4 cofD基因敲除载体的构建 | 第37-40页 |
| 2.1.5 电转化 | 第40页 |
| 2.1.6 cofD缺失验证 | 第40-42页 |
| 2.1.7 扩大培养及保种 | 第42页 |
| 2.1.8 数据统计分析 | 第42-43页 |
| 2.2 结果与分析 | 第43-46页 |
| 2.2.1 pUC18-cofD-tet基因敲除载体的构建 | 第43-45页 |
| 2.2.2 cofD基因缺失验证 | 第45-46页 |
| 2.3 讨论 | 第46-47页 |
| 2.4 小结 | 第47-48页 |
| 试验三 cofD基因敲除型与野生型反刍兽甲烷短杆菌辅酶F_(420)合成量和甲烷生成量的比较 | 第48-55页 |
| 3.1 材料和方法 | 第48-49页 |
| 3.1.1 甲烷菌株来源 | 第48页 |
| 3.1.2 培养基成分及配制 | 第48页 |
| 3.1.3 生长曲线比较试验 | 第48页 |
| 3.1.4 野生型与cofD基因敲除型菌株的比较试验 | 第48页 |
| 3.1.5 指标测定与方法 | 第48-49页 |
| 3.1.6 数据统计分析 | 第49页 |
| 3.2 结果与分析 | 第49-52页 |
| 3.2.1 野生型和cofD基因敲除型的反刍兽甲烷短杆菌生长曲线图比较 | 第49-50页 |
| 3.2.2 野生型和cofD基因敲除型的反刍兽甲烷短杆菌辅酶F_(420)合成量比较 | 第50-51页 |
| 3.2.3 野生型和cofD基因敲除型的反刍兽甲烷短杆菌甲烷产量比较 | 第51-52页 |
| 3.3 讨论 | 第52-54页 |
| 3.4 小结 | 第54-55页 |
| 第三章 全文结论与创新点 | 第55-56页 |
| 1.1 全文结论 | 第55页 |
| 1.2 创新点 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-64页 |
| 致谢 | 第64页 |
