| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 第1章 文献综述 | 第9-27页 |
| ·紫红曲霉 | 第9-10页 |
| ·紫红曲霉的重要产物 | 第10-16页 |
| ·红曲色素 | 第10-12页 |
| ·洛伐他汀(lovastatin) | 第12-14页 |
| ·橘霉素(citrinin) | 第14-16页 |
| ·聚酮化合物合成酶(PKS)基因 | 第16-22页 |
| ·简介 | 第16-17页 |
| ·真菌中的PKS | 第17-20页 |
| ·真菌中PKS基因的定位与克隆 | 第20页 |
| ·真菌中PKS基因的功能分析 | 第20-21页 |
| ·PKS基因的外源表达 | 第21-22页 |
| ·真菌中基因的同源重组 | 第22-26页 |
| ·同源重组 | 第22页 |
| ·DSB修复机制 | 第22-23页 |
| ·提高真菌中敲除基因的概率 | 第23-26页 |
| ·本课题的主要内容和意义 | 第26-27页 |
| 第2章 紫红曲霉PKS基因的克隆 | 第27-45页 |
| ·前言 | 第27页 |
| ·实验材料 | 第27-28页 |
| ·菌株、质粒及培养基 | 第27页 |
| ·主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第27-28页 |
| ·培养基及培养条件 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-31页 |
| ·紫红曲霉PKS基因的简并引物设计及简并PCR条件 | 第28-29页 |
| ·紫红曲霉基因组提取 | 第29-30页 |
| ·目的片段的克隆与验证 | 第30-31页 |
| ·Genome walking引物设计及Walking PCR反应条件 | 第31页 |
| ·Walking PCR产物拼接及序列分析 | 第31页 |
| ·序列分析 | 第31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-43页 |
| ·简并引物设计 | 第31-33页 |
| ·简并PCR及克隆测序 | 第33-40页 |
| ·Genome walking PCR得到ER基因全长及其序列分析 | 第40-43页 |
| ·讨论 | 第43-44页 |
| ·小结 | 第44-45页 |
| 第3章 紫红曲霉中MpLigD基因的克隆鉴定及序列分析 | 第45-58页 |
| ·前言 | 第45页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·菌株、质粒及培养基 | 第45页 |
| ·主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第45页 |
| ·培养基及培养条件 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·针对紫红曲霉MpLigD基因的简并引物设计及反应条件 | 第45-46页 |
| ·紫红曲霉基因组提取 | 第46页 |
| ·目的片段的克隆与验证 | 第46页 |
| ·Genome walking引物设计及Walking PCR反应条件 | 第46页 |
| ·Walking PCR产物拼接及序列分析 | 第46页 |
| ·序列分析 | 第46页 |
| ·实验结果 | 第46-57页 |
| ·简并引物设计 | 第46-48页 |
| ·简并PCR及克隆测序 | 第48-49页 |
| ·Genome walking PCR得到MpLigD基因全长 | 第49-53页 |
| ·MpLigD基因序列分析 | 第53-57页 |
| ·讨论 | 第57页 |
| ·小结 | 第57-58页 |
| 第4章 紫红曲霉△LigD∷hph菌株的构建 | 第58-74页 |
| ·前言 | 第58页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·菌株和质粒 | 第58页 |
| ·主要分子生物学试剂及试剂盒 | 第58页 |
| ·培养基及培养条件 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-65页 |
| ·目的基因片段的扩增及克隆转化 | 第59页 |
| ·质粒提取 | 第59-60页 |
| ·限制性内切酶酶切 | 第60页 |
| ·平末端化、去磷酸化及连接 | 第60-62页 |
| ·MpLigD缺失菌株构建策略 | 第62页 |
| ·双交换质粒pUC-LHO的构建 | 第62-63页 |
| ·紫红曲霉原生质体制备及检测 | 第63-64页 |
| ·紫红曲霉原生质体转化 | 第64页 |
| ·紫红曲霉转化子筛选 | 第64-65页 |
| ·紫红曲霉转化子验证 | 第65页 |
| ·实验结果 | 第65-73页 |
| ·pUC-U的获得 | 第65-67页 |
| ·pUC-UH的获得 | 第67-68页 |
| ·pUC-LH的获得 | 第68-70页 |
| ·pUC-LHO的获得 | 第70-71页 |
| ·转化子的筛选 | 第71-73页 |
| ·讨论 | 第73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第5章 结论与展望 | 第74-76页 |
| ·结论 | 第74页 |
| ·展望 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-83页 |
| 致谢 | 第83-84页 |
