| 中文摘要 | 第9-11页 |
| ABSTRACT | 第11-12页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一章 前言 | 第15-21页 |
| 1. G蛋白偶联受体的结构与功能 | 第15页 |
| 2. GPR120受体的结构特征、分布以及功能 | 第15-16页 |
| 3. GPR120受体与疾病的关系 | 第16-17页 |
| 4. 二十二碳六烯酸(DHA)的生物学功能 | 第17-18页 |
| 5. CRISPR-Cas9基因编辑系统简介 | 第18-19页 |
| 6. GPR120的小分子选择性抑制剂以及激活剂功能简介 | 第19页 |
| 7. 本课题的研究意义 | 第19-20页 |
| 8. 本课题拟解决的问题 | 第20-21页 |
| 第二章 DHA的抗肿瘤活性及其与GPR120受体的关系 | 第21-38页 |
| 1. 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1 细胞株 | 第21页 |
| 1.2 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.3 主要仪器 | 第22页 |
| 2. 实验方法与步骤 | 第22-29页 |
| 2.1 不同细胞株GPR120和GPR40蛋白表达情况 | 第22-24页 |
| 2.2 DHA对H460细胞凋亡的影响 | 第24-25页 |
| 2.3 DHA单独或联合GPR120小分子激动剂与抑制剂对H460细胞增殖的影响 | 第25-26页 |
| 2.4 划痕实验测定DHA单独或联合激活剂/抑制剂对细胞侵袭转移的影响 | 第26-27页 |
| 2.5 Transwell实验测定DHA单独或联合激活剂/抑制剂对细胞侵袭转移的影响 | 第27-28页 |
| 2.6 GPR120基因沉默对DHA细胞增殖抑制活性的影响 | 第28-29页 |
| 3. 实验结果 | 第29-36页 |
| 3.1 不同细胞株GPR120和GPR40的蛋白表达水平的测定 | 第29页 |
| 3.2 DHA对H460细胞凋亡的影响 | 第29-30页 |
| 3.3 DHA单独或联合GPR120激动剂与抑制剂对H460细胞增殖的影响 | 第30-32页 |
| 3.4 DHA单独或联合激活剂/抑制剂对细胞侵袭转移的影响 | 第32-35页 |
| 3.5 GPR120基因沉默对DHA细胞增殖抑制活性的影响 | 第35-36页 |
| 4. 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 GPR120基因敲除或高表达稳定细胞株的构建 | 第38-67页 |
| 1. 实验材料 | 第38-39页 |
| 1.1 质粒载体、sgRNA、Stb13感受态细胞 | 第38页 |
| 1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 仪器设备 | 第39页 |
| 2. 实验方法及步骤 | 第39-57页 |
| 2.1 含有GPR120或GPR40靶向sgRNA序列的LentiCRISPRv2质粒构建 | 第39-44页 |
| 2.2 基因水平检测构建质粒的敲除效率 | 第44-48页 |
| 2.3 蛋白水平检测构建质粒的敲除效率 | 第48页 |
| 2.4 基因敲除株构建 | 第48-50页 |
| 2.5 p3FLAG-CMV-10/GPR120高表达质粒载体构建 | 第50-54页 |
| 2.6 pHBLV-CMV-MCS-3FLAG-ZsGreen-PURO/h-GPR120过表达载体构建 | 第54-57页 |
| 3. 实验结果 | 第57-65页 |
| 3.1 含有靶向sgRNA序列的LentiCRISPRv2质粒构建 | 第57-59页 |
| 3.2 使用DNA检测基因敲除效率 | 第59-60页 |
| 3.3 使用蛋白检测基因敲除效率 | 第60-61页 |
| 3.4 GPR120基因敲除细胞株的筛选与鉴定 | 第61-62页 |
| 3.5 p3FLAG-CMV-10/ GPR120高表达质粒构建 | 第62-63页 |
| 3.6 pHBLV-CMV-MCS-3FLAG-ZsGreen-PURO/h-GPR120载体构建结果 | 第63-64页 |
| 3.7 GPR120基因高表达细胞株的筛选与鉴定 | 第64-65页 |
| 4. 讨论 | 第65-67页 |
| 全文总结 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 攻读硕士期间发表的论文 | 第73-74页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第74页 |
