| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 抗菌肽的特点 | 第11页 |
| 1.2 抗菌肽的作用机理 | 第11-13页 |
| 1.3 抗菌肽的抗菌活性 | 第13-16页 |
| 1.3.1 抗菌肽的生物活性 | 第13页 |
| 1.3.2 抗菌肽的结构与杀菌活性 | 第13-16页 |
| 1.4 抗菌肽转基因植物的研究 | 第16-17页 |
| 1.5 水稻抗白叶枯病转基因的研究进展 | 第17-20页 |
| 1.5.1 水稻白叶枯病 | 第17-18页 |
| 1.5.2 病原菌对水稻的侵染 | 第18-19页 |
| 1.5.3 水稻白叶枯病抗病基因概述 | 第19-20页 |
| 1.6 本研究的依据和意义 | 第20-21页 |
| 2 抗菌蛋白E12的表达纯化 | 第21-41页 |
| 2.1 前言 | 第21-22页 |
| 2.2 材料 | 第22-24页 |
| 2.2.1 实验菌株 | 第22页 |
| 2.2.2 质粒和载体 | 第22页 |
| 2.2.3 仪器设备 | 第22页 |
| 2.2.4 生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.2.5 培养基及试剂 | 第23-24页 |
| 2.3 方法 | 第24-34页 |
| 2.3.1 E12-GST载体构建 | 第24-29页 |
| 2.3.2 蛋白诱导表达 | 第29-31页 |
| 2.3.3 蛋白纯化 | 第31-34页 |
| 2.4 结果分析 | 第34-39页 |
| 2.4.1 pGEX-6P-1-E12载体构建及鉴定 | 第34-35页 |
| 2.4.2 最佳起始诱导浓度的确定 | 第35-36页 |
| 2.4.3 最佳诱导时间的确定 | 第36-37页 |
| 2.4.4 GST-E12蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 2.4.5 GST-E12蛋白的Western blotting验证 | 第38-39页 |
| 2.5 讨论 | 第39-41页 |
| 3 抗菌肽体内抑菌试验 | 第41-53页 |
| 3.1 前言 | 第41页 |
| 3.2 材料 | 第41-43页 |
| 3.2.1 实验菌株 | 第41页 |
| 3.2.2 质粒与载体 | 第41页 |
| 3.2.3 仪器与设备 | 第41页 |
| 3.2.4 生化试剂 | 第41-42页 |
| 3.2.5 培养基 | 第42-43页 |
| 3.3 方法 | 第43-49页 |
| 3.3.1、载体构建 | 第43-47页 |
| 3.3.2 水稻黄单胞菌(Xoo,R6)感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 3.3.3 电击转化 | 第48页 |
| 3.3.4 黄单胞杆菌转化子PCR检测 | 第48页 |
| 3.3.5 E12蛋白的Xoo体内抑菌试验 | 第48-49页 |
| 3.4 结果与分析 | 第49-51页 |
| 3.4.1 粘粒表达载体构建和黄单胞杆菌转化 | 第49-50页 |
| 3.4.2 体内抑菌试验 | 第50-51页 |
| 3.4.3 菌形态观察 | 第51页 |
| 3.5 讨论 | 第51-53页 |
| 4. 抗菌蛋白E12在水稻中的表达 | 第53-62页 |
| 4.1 前言 | 第53页 |
| 4.2 材料 | 第53-54页 |
| 4.2.1 植物材料 | 第53页 |
| 4.2.2 菌株和质粒 | 第53页 |
| 4.2.3 水稻组织培养基 | 第53-54页 |
| 4.3 方法 | 第54-58页 |
| 4.3.1 E12密码子优化以及人工合成 | 第54页 |
| 4.3.2 E12基因过表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 4.3.3 水稻的遗传转化试验 | 第55-56页 |
| 4.3.4 植物RNA的提取和逆转录cDNA以及半定量检测 | 第56-58页 |
| 4.3.5 水稻的抗性鉴定 | 第58页 |
| 4.4 实验结果 | 第58-61页 |
| 4.4.1 转基因双元载体的构建 | 第58-59页 |
| 4.4.2 转基因植株的验证 | 第59-60页 |
| 4.4.3 半定量RT-PCR | 第60页 |
| 4.4.4 E12转基因植株的抗病性检测 | 第60-61页 |
| 4.5 讨论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-69页 |
| 附录 | 第69-75页 |
| 攻读学位期间发表的论文目录 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
