| 致谢 | 第5-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-11页 |
| 第一章 绪论 | 第15-43页 |
| 1.1 手性 | 第15页 |
| 1.2 手性醇的重要性 | 第15-18页 |
| 1.3 手性醇的合成 | 第18-24页 |
| 1.3.1 手性源合成 | 第18页 |
| 1.3.2 外消旋体拆分 | 第18-20页 |
| 1.3.3 不对称还原 | 第20-24页 |
| 1.4 不对称还原生物催化剂 | 第24-32页 |
| 1.4.1 不对称还原生物催化剂的挖掘 | 第25-28页 |
| 1.4.2 短链脱氢酶 | 第28-31页 |
| 1.4.3 不对称还原生物催化剂的立体选择性 | 第31-32页 |
| 1.5 不对称还原生物催化剂的分子改造 | 第32-35页 |
| 1.5.1 选择性的调控 | 第32-34页 |
| 1.5.2 催化活性的调控 | 第34-35页 |
| 1.6 生物大分子中芳香环和卤素参与的相互作用 | 第35-41页 |
| 1.6.1 芳香环 | 第36-39页 |
| 1.6.2 卤素 | 第39-40页 |
| 1.6.3 芳香环与卤素间相互作用 | 第40-41页 |
| 1.7 本课题研究的意义及内容 | 第41-43页 |
| 第二章 遵循Anti-Prelog规则还原潜手性酮菌株的筛选 | 第43-59页 |
| 2.1 引言 | 第43-44页 |
| 2.2 材料与方法 | 第44-47页 |
| 2.2.1 材料 | 第44页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第44页 |
| 2.2.3 培养基 | 第44页 |
| 2.2.4 菌种筛选过程 | 第44-45页 |
| 2.2.5 菌种鉴定 | 第45页 |
| 2.2.6 静息细胞催化潜手性酮还原 | 第45-47页 |
| 2.2.7 分析及计算方法 | 第47页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第47-58页 |
| 2.3.1 Anti-Prelog立体选择性菌株筛选 | 第48页 |
| 2.3.2 菌株ZJUY-1401的鉴定 | 第48-51页 |
| 2.3.3 辅酶对全细胞催化不对称还原的影响 | 第51页 |
| 2.3.4 辅底物对全细胞催化不对称还原的影响 | 第51-54页 |
| 2.3.5 温度对全细胞催化不对称还原的影响 | 第54页 |
| 2.3.6 pH对全细胞催化不对称还原的影响 | 第54-55页 |
| 2.3.7 金属离子和还原剂对全细胞催化不对称还原的影响 | 第55-56页 |
| 2.3.8 E.brevis ZJUY-1401全细胞催化潜手性酮不对称还原 | 第56-58页 |
| 2.4 本章小结 | 第58-59页 |
| 第三章 羰基还原酶EBSDR8和PPYSDR的克隆与表达 | 第59-72页 |
| 3.1 引言 | 第59页 |
| 3.2 材料与方法 | 第59-64页 |
| 3.2.1 材料 | 第60页 |
| 3.2.2 主要仪器 | 第60页 |
| 3.2.3 菌株的培养 | 第60-61页 |
| 3.2.4 羰基还原酶基因的克隆 | 第61-63页 |
| 3.2.5 羰基还原酶重组蛋白的表达和纯化 | 第63页 |
| 3.2.6 羰基还原酶催化苯乙酮不对称还原 | 第63页 |
| 3.2.7 分析及计算方法 | 第63-64页 |
| 3.2.8 同源建模 | 第64页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第64-71页 |
| 3.3.1 羰基还原酶EbSDR8基因克隆、蛋白表达和序列分析 | 第64-66页 |
| 3.3.2 羰基还原酶PpYSDR基因的克隆、蛋白表达和序列分析 | 第66-68页 |
| 3.3.3 羰基还原酶EbSDR8和PpYSDR不对称还原苯乙酮 | 第68页 |
| 3.3.4 羰基还原酶EbSDR8和PpYSDR同源建模 | 第68-71页 |
| 3.4 本章小结 | 第71-72页 |
| 第四章 羰基还原酶EBSDR8和PPYSDR的催化性质表征 | 第72-88页 |
| 4.1 引言 | 第72页 |
| 4.2 材料与方法 | 第72-75页 |
| 4.2.1 材料 | 第72页 |
| 4.2.2 主要仪器 | 第72-73页 |
| 4.2.3 重组蛋白的诱导表达及纯化 | 第73页 |
| 4.2.4 催化性质表征 | 第73-74页 |
| 4.2.5 动力学常数测定 | 第74页 |
| 4.2.6 重组大肠杆菌全细胞催化潜手性酮不对称还原 | 第74页 |
| 4.2.7 分析及计算方法 | 第74-75页 |
| 4.2.8 分子对接 | 第75页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第75-86页 |
| 4.3.1 辅酶依赖型 | 第75-77页 |
| 4.3.2 辅底物的筛选 | 第77-78页 |
| 4.3.3 最适反应pH | 第78-79页 |
| 4.3.4 最适反应温度和热稳定性 | 第79-80页 |
| 4.3.5 金属离子和还原剂的影响 | 第80-81页 |
| 4.3.6 重组大肠杆菌全细胞催化潜手性酮的不对称还原 | 第81-86页 |
| 4.4 本章小结 | 第86-88页 |
| 第五章 以结构为指导的羰基还原酶立体选择性的反转 | 第88-103页 |
| 5.1 引言 | 第88-89页 |
| 5.2 材料与方法 | 第89-91页 |
| 5.2.1 材料 | 第89页 |
| 5.2.2 主要仪器 | 第89页 |
| 5.2.3 突变体的构建 | 第89-90页 |
| 5.2.4 突变体蛋白表达和纯化 | 第90页 |
| 5.2.5 圆二色谱分析 | 第90-91页 |
| 5.2.6 PpYSDR及其突变体催化潜手性酮不对称还原 | 第91页 |
| 5.2.7 动力学常数测定 | 第91页 |
| 5.2.8 分析及计算方法 | 第91页 |
| 5.2.9 分子对接 | 第91页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第91-102页 |
| 5.3.1 突变位点的选择 | 第91-93页 |
| 5.3.2 立体选择性调控策略 | 第93-94页 |
| 5.3.3 PpYSDR及其突变体不对称还原卤代苯乙酮 | 第94-96页 |
| 5.3.4 PpYSDR立体选择性反转的分子基础 | 第96-102页 |
| 5.3.5 PpYSDR及其突变体不对称还原潜手性酮动力学分析 | 第102页 |
| 5.4 本章小结 | 第102-103页 |
| 第六章 理性设计提高羰基还原酶EBSDR8的催化活性 | 第103-117页 |
| 6.1 引言 | 第103页 |
| 6.2 材料与方法 | 第103-106页 |
| 6.2.1 材料 | 第103-104页 |
| 6.2.2 主要仪器 | 第104页 |
| 6.2.3 突变体的构建 | 第104页 |
| 6.2.4 突变体蛋白表达和纯化 | 第104-105页 |
| 6.2.5 圆二色谱分析 | 第105页 |
| 6.2.6 EbSDR8及其突变体催化潜手性酮不对称还原 | 第105页 |
| 6.2.7 动力学常数测定 | 第105页 |
| 6.2.8 静息细胞不对称还原高浓度2,2,2-三氟苯乙酮 | 第105页 |
| 6.2.9 分析及计算方法 | 第105-106页 |
| 6.2.10 分子对接 | 第106页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第106-116页 |
| 6.3.1 突变位点选择 | 第106-107页 |
| 6.3.2 突变体设计和构建 | 第107-108页 |
| 6.3.3 EbSDR8及其突变体不对称还原潜手性酮 | 第108-110页 |
| 6.3.4 EbSDR8及其突变体不对称还原潜手性酮动力学分析 | 第110-111页 |
| 6.3.5 EbSDR8突变体活性提高的分子基础 | 第111-115页 |
| 6.3.6 全细胞不对称还原高浓度2,2,2-三氟苯乙酮 | 第115-116页 |
| 6.4 本章小结 | 第116-117页 |
| 第七章 结论与展望 | 第117-120页 |
| 7.1 结论 | 第117-118页 |
| 7.2 展望 | 第118-120页 |
| 参考文献 | 第120-135页 |
| 附录 | 第135-141页 |
| 作者简历 | 第141页 |
