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稻瘟菌效应因子AvrPiz-t及其水稻靶蛋白APIP12的功能研究

致谢第6-7页
摘要第7-9页
ABSTRACT第9-10页
缩略词表第15-16页
第一章 文献综述第16-35页
    1.1 病原物模式分子触发免疫(PTI)第17-20页
        1.1.1 已鉴定的PRR/PAMP模式第17-20页
        1.1.2 病原物对PTI的干扰第20页
    1.2 植物R基因介导的抗病机制(ETI)第20-28页
        1.2.1 稻瘟菌中已克隆和鉴定的效应因子第21-22页
        1.2.2 水稻中已克隆的R基因及其特点第22-24页
        1.2.3 R基因与无毒基因的互作第24-27页
        1.2.4 ETI的信号传导受到核孔蛋白的控制第27-28页
    1.3 核孔复合体及核孔蛋白98的研究进展第28-34页
        1.3.1 核孔复合体的结构第28页
        1.3.2 核孔复合体的蛋白组成第28-30页
        1.3.3 大分子物质在核孔中的转运第30-31页
        1.3.4 核孔蛋白Nup98的研究进展第31-33页
        1.3.5 植物中核孔蛋白的功能研究第33-34页
    1.4 本研究的主要内容、目的和意义第34-35页
第二章 稻瘟菌效应因子AvrPiz-t氨基酸残基的功能分析第35-52页
    2.1 材料与方法第37-43页
        2.1.1 供试植物第37页
        2.1.2 供试菌株第37页
        2.1.3 供试载体第37页
        2.1.4 试剂和试剂盒第37-38页
        2.1.5 培养基和试剂配方第38页
        2.1.6 载体的构建第38-40页
        2.1.7 水稻的稻瘟菌接种实验第40页
        2.1.8 细菌转化、培养及质粒提取第40页
        2.1.9 稻瘟菌转化实验第40-41页
        2.1.10 AvrPiz-t突变体与APIP蛋白的酵母双杂互作实验第41-42页
        2.1.11 农杆菌侵染烟草瞬时过表达实验第42-43页
    2.2 结果与分析第43-50页
        2.2.1 AvrPiz-t氨基酸残基突变位点的选择第43-44页
        2.2.2 突变位点表达载体的构建第44-45页
        2.2.3 AvrPiz-t氨基酸残基突变位点的功能互补分析第45-46页
        2.2.4 AvrPiz-t氨基酸残基突变体与APIP蛋白互作分析第46-48页
        2.2.5 AvrPiz-t及氨基酸残基突变体的亚细胞定位第48-50页
    2.3 讨论第50-52页
第三章 AvrPiz-t水稻靶蛋白APIP12功能分析第52-77页
    3.1 材料与方法第52-60页
        3.1.1 供试植物第52-53页
        3.1.2 供试菌株第53页
        3.1.3 供试载体第53页
        3.1.4 蛋白序列同源分析和系统进化分析第53页
        3.1.5 载体构建第53-55页
        3.1.6 水稻和稻瘟菌的培养以及致病性分析第55页
        3.1.7 转基因植株的获得第55页
        3.1.8 水稻基因组DNA提取第55页
        3.1.9 植物RNA提取,cDNA合成第55-56页
        3.1.10 反转录、RT-PCR与Real-time PCR第56-57页
        3.1.11 水稻原生质体的瞬时表达实验第57-58页
        3.1.12 重组蛋白的原核表达和纯化第58-59页
        3.1.13 GST-Pulldown第59页
        3.1.14 蛋白电泳和Western杂交第59-60页
    3.2 结果与分析第60-75页
        3.2.1 APIP12编码一个水稻特有的新型Nup98同源蛋白第60-61页
        3.2.2 APIP12与AvrPiz-t互作验证第61-63页
        3.2.3 中花11中敲除APIP12导致水稻稻瘟病抗性下降第63-65页
        3.2.4 APIP12 RNAi转基因日本晴水稻的稻瘟病抗性下降第65-66页
        3.2.5 APIP12过表达转基因日本晴水稻稻瘟病抗性无明显变化第66-68页
        3.2.6 APIP12的异位表达不干扰Piz-t介导的稻瘟病抗性第68-69页
        3.2.7 APIP12基因在抗病基因表达调控中的作用第69-71页
        3.2.8 APIP12蛋白的亚细胞定位第71页
        3.2.9 APIP12蛋白与AvrPiz-t蛋白的共定位第71-73页
        3.2.10 APIP12蛋白与其它蛋白的互作第73-75页
    3.3 讨论第75-77页
结论与展望第77-78页
参考文献第78-90页

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