| 摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-27页 |
| 前言 | 第14页 |
| 1.1 植物性饲料的特点及其利用概况 | 第14-15页 |
| 1.1.1 植物性饲料的特点 | 第14-15页 |
| 1.1.2 动物对纤维质饲料的利用现状 | 第15页 |
| 1.2 纤维素酶对纤维质物质的降解 | 第15-16页 |
| 1.3 植物性饲料的预处理方法 | 第16-18页 |
| 1.3.1 物理预处理 | 第16页 |
| 1.3.2 化学预处理 | 第16-17页 |
| 1.3.3 生物学预处理 | 第17-18页 |
| 1.4 纤维素酶基因工程乳酸菌 | 第18-22页 |
| 1.4.1 纤维素酶基因的克隆与表达 | 第18页 |
| 1.4.2 乳酸杆菌是外源蛋白的理想表达宿主 | 第18-19页 |
| 1.4.3 启动子 | 第19-21页 |
| 1.4.4 信号肽 | 第21-22页 |
| 1.4.5 外源基因在乳酸杆菌中的共表达 | 第22页 |
| 1.5 无抗标记乳酸杆菌重组技术 | 第22-24页 |
| 1.6 CRISPR–Cas系统及其在乳酸杆菌基因组编辑中的应用 | 第24-25页 |
| 1.7 本研究的目的意义 | 第25-27页 |
| 第二章 纤维素酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 | 第27-43页 |
| 前言 | 第27页 |
| 2.1 材料和方法 | 第27-34页 |
| 2.1.1 材料 | 第27-28页 |
| 2.1.2 方法 | 第28-34页 |
| 2.2 结果与分析 | 第34-40页 |
| 2.2.1 纤维素酶基因的克隆及序列分析 | 第34-36页 |
| 2.2.2 纤维素酶基因表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.2.3 纤维素酶基因在大肠杆菌中的表达 | 第37-38页 |
| 2.2.4 重组酶的部分酶学性质 | 第38-39页 |
| 2.2.5 重组菌纤维素酶活性分析 | 第39-40页 |
| 2.3 讨论 | 第40-41页 |
| 2.4 小结 | 第41-43页 |
| 第三章 乳酸杆菌共表达载体启动子和信号肽筛选 | 第43-63页 |
| 前言 | 第43-44页 |
| 3.1 材料与方法 | 第44-52页 |
| 3.1.1 材料 | 第44-46页 |
| 3.1.2 方法 | 第46-52页 |
| 3.2 结果与分析 | 第52-60页 |
| 3.2.1 一种基于POE-PCR快速构建含多个外源DNA片段复杂载体的方法 | 第52-54页 |
| 3.2.2 乳酸菌组成型启动子的功能比较 | 第54-56页 |
| 3.2.3 乳酸杆菌分泌表达载体信号肽的功能比较 | 第56-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60-62页 |
| 3.3.1 基于POE-PCR技术的复杂载体构建方法 | 第60-61页 |
| 3.3.2 乳酸杆菌共表达载体启动子和信号肽筛选 | 第61-62页 |
| 3.4 小结 | 第62-63页 |
| 第四章 共表达多元纤维素酶乳酸杆菌的构建 | 第63-84页 |
| 前言 | 第63页 |
| 4.1 材料和方法 | 第63-69页 |
| 4.1.1 质粒、菌株及培养条件 | 第63-64页 |
| 4.1.2 主要培养基与溶液 | 第64页 |
| 4.1.3 PCR与DNA操作 | 第64-65页 |
| 4.1.4 质粒的构建 | 第65-68页 |
| 4.1.5 重组乳酸杆菌粗饲料发酵试验 | 第68-69页 |
| 4.2 结果与分析 | 第69-80页 |
| 4.2.1 表达单个纤维素酶乳酸杆菌的构建 | 第69-70页 |
| 4.2.2 表达二元纤维素酶乳酸杆菌的构建 | 第70-71页 |
| 4.2.3 表达三元纤维素酶乳酸杆菌的构建 | 第71-72页 |
| 4.2.4 纤维素酶基因在L. reuter XNY中的表达 | 第72-76页 |
| 4.2.5 重组乳酸杆菌XNY/pLEM415-cenA-eglS3-bglS的纤维降解效果 | 第76-80页 |
| 4.3 讨论 | 第80-82页 |
| 4.4 小结 | 第82-84页 |
| 第五章 无抗标记乳酸杆菌重组技术的研究 | 第84-102页 |
| 前言 | 第84页 |
| 5.1 材料与方法 | 第84-92页 |
| 5.1.1 质粒、菌株和培养条件 | 第84-85页 |
| 5.1.2 主要培养基与溶液 | 第85-86页 |
| 5.1.3 PCR与DNA操作 | 第86-87页 |
| 5.1.4 pheS基因的克隆及其点突变基因pheSM的构建 | 第87-88页 |
| 5.1.5 pheSM基因乳酸杆菌表达载体的构建及其在L. reuteri XNY中的表达 | 第88页 |
| 5.1.6 无抗标记乳酸杆菌基因整合技术的建立 | 第88-91页 |
| 5.1.7 纤维素酶基因在乳酸杆菌中的表达 | 第91页 |
| 5.1.8 重组乳酸杆菌的部分生物学特性 | 第91-92页 |
| 5.2 结果与分析 | 第92-100页 |
| 5.2.1 pheS基因的克隆及其点突变基因的构建 | 第92-94页 |
| 5.2.2 pheSM基因乳酸杆菌表达载体的构建及其在L. reuteri XNY中的表达 | 第94-95页 |
| 5.2.3 正反选择标记重组乳酸杆菌的构建 | 第95-97页 |
| 5.2.4 无抗标记纤维素酶基因重组乳酸杆菌的构建 | 第97-98页 |
| 5.2.5 纤维素酶基因在乳酸杆菌中的表达 | 第98-99页 |
| 5.2.6 重组乳酸杆菌的部分生物学特性 | 第99-100页 |
| 5.3 讨论 | 第100-101页 |
| 5.4 小结 | 第101-102页 |
| 第六章 结论 | 第102-104页 |
| 6.1 研究结论 | 第102-103页 |
| 6.2 本研究创新点 | 第103页 |
| 6.3 还需深入研究的问题 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-118页 |
| 附录 | 第118-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 作者简介 | 第125页 |
