| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-36页 |
| 第一章 猪流行性腹泻研究进展 | 第12-36页 |
| 1 PEDV概述 | 第12-18页 |
| 1.1 PEDV的生物学分类地位和形态特征 | 第12-13页 |
| 1.2 理化与培养特性 | 第13-14页 |
| 1.3 基因组结构与复制 | 第14-15页 |
| 1.4 PEDV的非结构蛋白及其功能 | 第15-16页 |
| 1.5 PEDV的结构蛋白及其功能 | 第16-18页 |
| 2 PED流行病学 | 第18-20页 |
| 3 我国近年PEDV变异 | 第20-21页 |
| 4 PED诊断技术 | 第21-25页 |
| 4.1 病原学诊断技术 | 第21-22页 |
| 4.2 血清学诊断技术 | 第22-24页 |
| 4.3 分子生物学诊断技术 | 第24-25页 |
| 5 PEDV疫苗 | 第25-27页 |
| 5.1 PEDV灭活疫苗 | 第26页 |
| 5.2 弱毒疫苗 | 第26页 |
| 5.3 乳酸杆菌载体疫苗 | 第26页 |
| 5.4 转基因植物疫苗 | 第26-27页 |
| 5.5 核酸疫苗 | 第27页 |
| 6 PEDV的综合防治 | 第27-28页 |
| 参考文献 | 第28-36页 |
| 第二篇 实验内容 | 第36-82页 |
| 第二章 猪流行性腹泻病毒截短S蛋白的原核表达 | 第36-58页 |
| 1 材料 | 第36-38页 |
| 1.1 细胞和病毒 | 第36-37页 |
| 1.2 菌株与载体 | 第37页 |
| 1.3 主要试剂 | 第37页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第37页 |
| 1.5 引物设计 | 第37-38页 |
| 2 方法 | 第38-47页 |
| 2.1 提取病毒的RNA | 第38页 |
| 2.2 反转录合成cDNA及目的基因的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 2.3 PCR产物的回收 | 第39-40页 |
| 2.4 PCR产物与表达载体pET-28a的酶切 | 第40页 |
| 2.5 酶切产物的胶回收 | 第40-41页 |
| 2.6 目的基因与载体的连接 | 第41页 |
| 2.7 连接产物的转化 | 第41-42页 |
| 2.8 重组质粒提取与鉴定 | 第42-43页 |
| 2.9 重组蛋白的表达与鉴定 | 第43-45页 |
| 2.10 重组蛋白S1表达条件的优化 | 第45页 |
| 2.11 重组蛋白的大量表达和纯化复性 | 第45-47页 |
| 2.12 Western blotting鉴定重组蛋白的抗原性 | 第47页 |
| 3 试验结果 | 第47-53页 |
| 3.1 S1基因的PCR扩增 | 第47-48页 |
| 3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第48页 |
| 3.3 重组质粒的测序 | 第48-49页 |
| 3.4 阳性重组菌的菌液PCR鉴定 | 第49-50页 |
| 3.5 重组蛋白S1的鉴定 | 第50页 |
| 3.6 重组蛋白S1表达条件的优化 | 第50-52页 |
| 3.7 重组蛋白表达形式的判定 | 第52页 |
| 3.8 重组蛋白的纯化复性 | 第52-53页 |
| 3.9 重组蛋白S1的Western blotting鉴定 | 第53页 |
| 4 讨论 | 第53-55页 |
| 4.1 表达系统的选择 | 第53-54页 |
| 4.2 目的基因序列的选择 | 第54页 |
| 4.3 蛋白的纯化和活性 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-58页 |
| 第三章 PEDV抗体间接ELISA方法的建立 | 第58-70页 |
| 1 材料 | 第58-59页 |
| 2 方法 | 第59-61页 |
| 2.1 间接ELISA常规操作步骤 | 第59页 |
| 2.2 最佳抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第59页 |
| 2.3 包被条件的确定 | 第59页 |
| 2.4 最佳封闭液的确定 | 第59-60页 |
| 2.5 血清最佳作用时间的确定 | 第60页 |
| 2.6 酶标二抗浓度的选择 | 第60页 |
| 2.7 酶标二抗作用时间的选择 | 第60页 |
| 2.8 显色时间的确定 | 第60页 |
| 2.9 ELISA方法临界值的确定 | 第60页 |
| 2.10 重复性试验 | 第60-61页 |
| 2.11 特异性试验 | 第61页 |
| 3 结果 | 第61-66页 |
| 3.1 最佳抗原包被浓度和血清稀释度的确定 | 第61页 |
| 3.2 抗原最佳包被条件的确定 | 第61-62页 |
| 3.3 最适封闭液的确定 | 第62页 |
| 3.4 血清作用时间的确定 | 第62-63页 |
| 3.5 酶标二抗最佳稀释度的确定 | 第63页 |
| 3.6 酶标二抗最佳作用时间的确定 | 第63页 |
| 3.7 显色时间的确定 | 第63-64页 |
| 3.8 间接ELISA方法临界值的确定 | 第64页 |
| 3.9 重复性试验 | 第64-65页 |
| 3.10 特异性试验 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-70页 |
| 第四章 PEDV抗体间接ELISA方法的初步应用 | 第70-82页 |
| 1 材料 | 第71页 |
| 2 方法 | 第71页 |
| 2.1 符合率的测定 | 第71页 |
| 2.2 临床血清样品检测 | 第71页 |
| 3 结果 | 第71-77页 |
| 3.1 符合率测定结果 | 第71-72页 |
| 3.2 临床血清的检测和分析 | 第72-77页 |
| 4 讨论 | 第77-79页 |
| 参考文献 | 第79-82页 |
| 全文总结 | 第82-84页 |
| 致谢 | 第84页 |