| 中文摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-27页 |
| ·细胞色素P450酶的研究进展及其在药物代谢中的作用 | 第10-18页 |
| ·CYP的命名与分布 | 第10-11页 |
| ·CYP的组成及其在药物代谢中的作用 | 第11页 |
| ·细胞色素P450的结构特征 | 第11-12页 |
| ·P450酶系的催化机制 | 第12页 |
| ·影响CYP活性的因素 | 第12-13页 |
| ·药物研发中CYPs研究的地位 | 第13页 |
| ·与CYP有关的药物代谢研究方法进展 | 第13-15页 |
| ·最常用到的与CYP有关的体外药物代谢检测方法 | 第15-16页 |
| ·CYP450s异源表达系统 | 第16-18页 |
| ·CYP2C19基因多态性研究进展 | 第18-22页 |
| ·CYP2C19基因结构概况 | 第18页 |
| ·CYP2C19基因多态性的分子机制 | 第18-21页 |
| ·CYP2C19的多态性检测方法 | 第21页 |
| ·影响CYP2C19活性的因素 | 第21页 |
| ·CYP2C19基因多态性与药物代谢及疗效的关系 | 第21-22页 |
| ·CYP2D6基因多态性研究进展 | 第22-25页 |
| ·CYP2D6基因结构概况 | 第22页 |
| ·CYP2D6基因分型与表型分型的关系 | 第22-24页 |
| ·CYP2D6基因多态性与药物代谢及疗效的关系及个体化治疗 | 第24-25页 |
| ·CYP2D6的代谢底物及其相互作用 | 第25页 |
| ·论文研究目的与立题意义 | 第25-27页 |
| 第二章 CYP2C19和CYP2D6两个新变异体在酿酒酵母中的表达和鉴定 | 第27-42页 |
| ·材料 | 第27-30页 |
| ·菌株和质粒 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27-28页 |
| ·主要溶液和培养基的配方 | 第28-30页 |
| ·主要仪器 | 第30页 |
| ·方法 | 第30-36页 |
| ·pYES2/CT-CYP2C19和CYP2D6重组表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·重组酵母菌株的构建 | 第33页 |
| ·目的蛋白的表达和鉴定 | 第33-35页 |
| ·重组酵母微粒体的制备和检测 | 第35-36页 |
| ·结果 | 第36-40页 |
| ·pYES2/CT-CYP2C19,CYP2D6重组表达载体的构建 | 第36-38页 |
| ·目的蛋白的Western Blot分析 | 第38-39页 |
| ·微粒体蛋白浓度的测定 | 第39页 |
| ·CYP2C19和CYP2D6酶的CO定量 | 第39-40页 |
| ·讨论 | 第40-42页 |
| ·重叠延伸PCR的优缺点 | 第40页 |
| ·重组质粒在酿酒酵母中的表达 | 第40-41页 |
| ·重组酶的优点 | 第41页 |
| ·一氧化碳差示光谱法测定CYP的含量 | 第41-42页 |
| 第三章 人重组CYP2C19和CYP2D6两个突变株的酶学分析 | 第42-51页 |
| ·材料 | 第42-43页 |
| ·酵母微粒体 | 第42页 |
| ·主要试剂 | 第42页 |
| ·主要溶液 | 第42-43页 |
| ·主要仪器 | 第43页 |
| ·方法 | 第43-45页 |
| ·用荧光底物CEC测定CYP2C19野生型和突变株T302R酶活 | 第43页 |
| ·用底物S-美芬托英测定CYP2C19野生型和突变株T302R酶活 | 第43-44页 |
| ·用荧光底物AMMC测定CYP2D6野生型和突变株R441H酶活 | 第44页 |
| ·用底物丁呋洛尔测定CYP2D6野生型和突变株R441H酶活 | 第44-45页 |
| ·结果与分析 | 第45-47页 |
| ·CYP2C19突变株T302R与野生株相比的酶活性 | 第45-46页 |
| ·CYP2D6突变株R441H与野生株相比的酶活性 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-51页 |
| ·基因多态性导致酶活性的多态性分析 | 第47-50页 |
| ·检测系统的选择 | 第50-51页 |
| 第四章 PCR-RFLP方法对CYP2C19~*2和CYP2C19~*3等位基因进行基因分型检测 | 第51-64页 |
| ·实验原理 | 第51-52页 |
| ·CYP2C19~*2(m1突变)的PCR-RFLP方法原理 | 第51-52页 |
| ·CYP2C19~*3(m2突变)的PCR-RFLP方法原理 | 第52页 |
| ·材料 | 第52-53页 |
| ·研究对象 | 第52-53页 |
| ·主要试剂 | 第53页 |
| ·实验方法 | 第53-56页 |
| ·基因组DNA提取 | 第53-54页 |
| ·引物设计及合成 | 第54-55页 |
| ·PCR扩增 | 第55页 |
| ·限制性内切酶消化 | 第55页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳分型及结果 | 第55页 |
| ·测序验证分型的准确性 | 第55-56页 |
| ·实验结果 | 第56-58页 |
| ·CYP2C19等位基因PCR-RFLP分析 | 第56页 |
| ·测序结果 | 第56-58页 |
| ·74例北京地区样本的CYP2C19等位基因频率的分析 | 第58页 |
| ·讨论 | 第58-64页 |
| ·影响PCR-RFLP的因素 | 第58-61页 |
| ·FTA卡片的特性 | 第61页 |
| ·以伏立康唑为例阐述CYP2C19基因多态性与药物剂量调整的关系 | 第61-64页 |
| 结论 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-73页 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 | 第73-74页 |
| 致谢 | 第74-75页 |
