| 中文摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 血红素概述 | 第11-13页 |
| 1.1.1 血红素的生物功能 | 第11-12页 |
| 1.1.2 血红素生物合成的过程 | 第12页 |
| 1.1.3 卟啉症 | 第12-13页 |
| 1.2 alas1基因概述 | 第13-14页 |
| 1.3 斑马鱼作为模式生物的优点 | 第14-15页 |
| 1.4 斑马鱼心脏发育调控 | 第15-17页 |
| 1.5 钙离子通路与斑马鱼心脏功能的关系 | 第17-18页 |
| 1.6 CRISPR-Cas9的作用机制 | 第18-20页 |
| 1.7 立题意义和主要研究内容 | 第20-21页 |
| 第二章 材料与方法 | 第21-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第21页 |
| 2.2 实验仪器 | 第21-22页 |
| 2.3 实验试剂 | 第22-23页 |
| 2.4 常用试剂配制 | 第23-25页 |
| 2.4.1 核酸电泳相关的缓冲液 | 第23页 |
| 2.4.2 原位杂交相关的试剂 | 第23-24页 |
| 2.4.3 细菌培养基 | 第24页 |
| 2.4.4 抗生素 | 第24页 |
| 2.4.5 Inoue法制备超级感受态细胞的相关溶液 | 第24-25页 |
| 2.5 引物序列 | 第25-26页 |
| 2.6 试验方法及设计 | 第26-42页 |
| 2.6.1 斑马鱼交配与胚胎的收集 | 第26页 |
| 2.6.2 斑马鱼基因组DNA的提取 | 第26页 |
| 2.6.3 胚胎总RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.6.4 mRNA反转成cDNA | 第27-28页 |
| 2.6.6 胶回收（试剂盒） | 第28-29页 |
| 2.6.7 目的片段连接到载体上及酶切鉴定 | 第29页 |
| 2.6.8 感受态细胞的制备 | 第29-30页 |
| 2.6.9 转化 | 第30页 |
| 2.6.10 转化试验重组子的鉴定 | 第30页 |
| 2.6.11 质粒的提取(试剂盒) | 第30-31页 |
| 2.6.12 显微注射 | 第31-32页 |
| 2.6.13 荧光定量PCR | 第32页 |
| 2.6.14 原位杂交过程 | 第32-35页 |
| 2.6.15 o-dianisidine染色 | 第35页 |
| 2.6.16 石蜡切片和HE染色 | 第35-36页 |
| 2.6.17 细胞培养 | 第36-37页 |
| 2.6.18 荧光素酶表达水平的检测 | 第37页 |
| 2.6.19 ChIP | 第37-38页 |
| 2.6.20 运用CRISPR-Cas9技术构建alas1、uros斑马鱼突变体 | 第38-41页 |
| 2.6.21 高通量转录组测序 | 第41页 |
| 2.6.22 数据统计分析 | 第41-42页 |
| 第三章 实验结果及分析 | 第42-62页 |
| 3.1 不同物种的ALAS1氨基酸序列具有较高的保守性 | 第42-43页 |
| 3.2 运用CRISPR-Cas9技术构建alas1基因缺陷的斑马鱼突变体 | 第43-46页 |
| 3.2.1 Cas9位点设计及gRNA合成 | 第43-45页 |
| 3.2.2 Cas9活性检验 | 第45页 |
| 3.2.3 alas1突变体筛选 | 第45-46页 |
| 3.3 alas1纯合突变体表现出心脏功能紊乱 | 第46-50页 |
| 3.4 alas1的缺失影响心脏标记基因的表达 | 第50-51页 |
| 3.5 alas1的缺失没有影响斑马鱼血管的发育 | 第51-52页 |
| 3.6 alas1突变体的转录组测序分析 | 第52-59页 |
| 3.7 转录因子Nrf2a-Mafk能激活atp2a1l的表达 | 第59-60页 |
| 3.8 alas1 mRNA和血红素能拯救atp2a1l基因的表达 | 第60-62页 |
| 第四章 硕士期间参与的其他研究 | 第62-68页 |
| 4.1 运用CRISPR-Cas9技术构建uros基因缺陷的斑马鱼突变体 | 第62-64页 |
| 4.1.1 Cas9位点设计及gRNA合成 | 第62-63页 |
| 4.1.2 Cas9活性检验 | 第63页 |
| 4.1.3 uros突变的体筛选 | 第63-64页 |
| 4.2 uros基因缺陷的斑马鱼突变体的表型分析 | 第64-65页 |
| 4.3 uros基因缺陷对血红素代谢途径中的基因表达的影响 | 第65-66页 |
| 4.4 人类UROS mRNA能够拯救突变体的表型 | 第66-68页 |
| 第五章 讨论与展望 | 第68-75页 |
| 5.1 成功构建了alas1基因缺陷的纯合突变体 | 第68-69页 |
| 5.2 alas1-/-突变体表现出明显的心脏功能障碍 | 第69-70页 |
| 5.3 alas1-/-突变体的转录组测序分析 | 第70-71页 |
| 5.4 atp2a1l基因的表达受Nrf2a/Bach1b-Mafk通路调控 | 第71-72页 |
| 5.5 alas1-/-突变体中血红素合成相关基因的表达量分析 | 第72-73页 |
| 5.6 alas1基因与生物钟系统的关系 | 第73-75页 |
| 第六章 结论 | 第75-76页 |
| 参考文献 | 第76-85页 |
| 附录 | 第85-86页 |
| 研究生期间已发表和待发表的论文 | 第86-87页 |
| 致谢 | 第87-89页 |
