| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 1 绪论 | 第10-18页 |
| 1.1 莱茵衣藻的简介 | 第10-11页 |
| 1.2 莱茵衣藻核基因工程 | 第11页 |
| 1.3 莱茵衣藻叶绿体基因工程 | 第11-15页 |
| 1.3.1 叶绿体转化原理 | 第12-13页 |
| 1.3.2 叶绿体转化方法 | 第13-14页 |
| 1.3.3 叶绿体转化的标记基因和报告基因 | 第14页 |
| 1.3.4 叶绿体表达系统存在的问题 | 第14-15页 |
| 1.4 莱茵衣藻应用 | 第15-17页 |
| 1.4.1 生产高价值生物制品 | 第15-16页 |
| 1.4.2 生物柴油 | 第16-17页 |
| 1.4.3 生物产氢 | 第17页 |
| 1.5 本实验研究的目的及意义 | 第17-18页 |
| 2 莱茵衣藻内源性“aadA表达盒”构建 | 第18-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第18-22页 |
| 2.1.1 仪器与主要设备 | 第18-19页 |
| 2.1.2 藻株和质粒 | 第19页 |
| 2.1.3 工具酶与试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制方法 | 第20-22页 |
| 2.2 实验方法 | 第22-31页 |
| 2.2.1 莱茵衣藻的培养 | 第22-23页 |
| 2.2.2 含有莱茵衣藻PpsbA启动子序列的表达载体构建 | 第23-27页 |
| 2.2.3 PpsbA-aadA表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.4 PpsbA-aadA-C1表达载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.5 pDHL-H21同源序列载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.6 pDHL-H22同源序列载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.2.7 H21-PpsbA-aadA-C1-H22对照载体的构建 | 第31页 |
| 2.3 结果与讨论 | 第31-40页 |
| 2.3.1 莱茵衣藻的生长曲线 | 第31-32页 |
| 2.3.2 莱茵衣藻细胞密度与OD_(750)的关系 | 第32-33页 |
| 2.3.3 PCR扩增PpsbA | 第33页 |
| 2.3.4 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-001 | 第33-34页 |
| 2.3.5 PCR扩增aadA | 第34页 |
| 2.3.6 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-002 | 第34-35页 |
| 2.3.7 PCR扩增C1 | 第35-36页 |
| 2.3.8 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-003 | 第36页 |
| 2.3.9 PCR扩增H21 | 第36-37页 |
| 2.3.10 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-H21 | 第37-38页 |
| 2.3.11 PCR扩增H22 | 第38页 |
| 2.3.12 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-H22 | 第38-39页 |
| 2.3.13 PCR筛选质粒pDHL-A1 | 第39-40页 |
| 2.3.14 酶切鉴定质粒pDHL-A1 | 第40页 |
| 2.4 本章小结 | 第40-42页 |
| 3 含有IEE功能元件的双顺反子测试系统构建 | 第42-55页 |
| 3.1 实验材料 | 第42页 |
| 3.2 实验方法 | 第42-47页 |
| 3.2.1 PpsbA-aadA-C11表达载体的构建 | 第42-43页 |
| 3.2.2 PpsbA-aadA-C11-nptⅡ表达载体的构建 | 第43-44页 |
| 3.2.3 PpsbA-aadA-C11-nptⅡ-C2表达载体的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.4 H21-PpsbA-aadA-C11-nptⅡ-C2-H22表达载体的构建 | 第45页 |
| 3.2.5 H21-PpsbA-aadA-C11-IEE-nptⅡ-C2-H22表达载体的构建 | 第45-47页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.3.1 PCR扩增C11 | 第47页 |
| 3.3.2 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-003’ | 第47-49页 |
| 3.3.3 PCR扩增nptⅡ | 第49页 |
| 3.3.4 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-004 | 第49-50页 |
| 3.3.5 PCR扩增C2 | 第50页 |
| 3.3.7 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-005 | 第50-51页 |
| 3.3.8 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-006 | 第51-52页 |
| 3.3.9 PCR扩增IEE | 第52-53页 |
| 3.3.10 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-007 | 第53-54页 |
| 3.3.11 PCR和酶切鉴定质粒pDHL-008 | 第54页 |
| 3.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 4 表达载体在莱茵衣藻中的表达与优化 | 第55-70页 |
| 4.1 实验材料 | 第55页 |
| 4.1.1 仪器与主要设备 | 第55页 |
| 4.1.2 藻株和质粒 | 第55页 |
| 4.1.3 工具酶与试剂 | 第55页 |
| 4.2 实验方法 | 第55-59页 |
| 4.2.1 莱茵衣藻细胞的准备 | 第55-56页 |
| 4.2.2 质粒的前期准备 | 第56-57页 |
| 4.2.3 玻璃珠转化 | 第57页 |
| 4.2.4 基因枪转化 | 第57-58页 |
| 4.2.5 电击转化 | 第58-59页 |
| 4.2.6 莱茵衣藻转化子的筛选培养 | 第59页 |
| 4.2.7 莱茵衣藻转化子的抗生素敏感性实验 | 第59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-69页 |
| 4.3.1 莱茵衣藻的转化结果 | 第59-61页 |
| 4.3.2 莱茵衣藻转化子对抗生素的敏感性 | 第61-62页 |
| 4.3.3 莱茵衣藻转化子的分子水平检测 | 第62-69页 |
| 4.4 本章小结 | 第69-70页 |
| 总结与展望 | 第70-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-79页 |
| 附录 | 第79页 |
