| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5页 |
| 引言 | 第10-11页 |
| 1 文献综述 | 第11-23页 |
| 1.1 血栓疾病研究进展简介 | 第11-16页 |
| 1.1.1 血栓的形成因素 | 第11-12页 |
| 1.1.2 血栓形成的生化过程及分子机制 | 第12-13页 |
| 1.1.3 血栓的治疗 | 第13-16页 |
| 1.2 溶茧酶的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.1 溶茧酶的生理生化特性 | 第16-17页 |
| 1.2.2 溶茧酶的克隆与表达 | 第17-18页 |
| 1.3 同源建模基础理论 | 第18-19页 |
| 1.4 分子对接基础理论 | 第19-20页 |
| 1.5 定点突变的概述 | 第20-21页 |
| 1.6 研究目的及意义 | 第21页 |
| 1.7 研究内容与技术路线 | 第21-23页 |
| 2 柞蚕溶茧酶模型构建和活性位点的预测 | 第23-31页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第23页 |
| 2.1.2 数据分析软件 | 第23-24页 |
| 2.2 柞蚕溶茧酶同源建模 | 第24-25页 |
| 2.2.1 同源建模 | 第24页 |
| 2.2.2 柞蚕溶茧酶与BAEE分子对接 | 第24-25页 |
| 2.3 结果与分析 | 第25-29页 |
| 2.3.1 柞蚕溶茧酶模型的构建 | 第25-28页 |
| 2.3.2 柞蚕溶茧酶与BAEE分子对接 | 第28-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 3 柞蚕溶茧酶基因活性位点的突变、克隆及表达载体的构建 | 第31-51页 |
| 3.1 实验材料和试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.1 材料和试剂 | 第31-32页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第32页 |
| 3.1.3 主要溶液 | 第32页 |
| 3.2 实验方法 | 第32-45页 |
| 3.2.1 柞蚕蛹下颚腺RNA的提取及cDNA的合成 | 第32-33页 |
| 3.2.2 柞蚕溶茧酶基因的克隆 | 第33-37页 |
| 3.2.3 柞蚕溶茧酶基因的突变与克隆 | 第37-40页 |
| 3.2.4 表达载体p-E-G的构建 | 第40-43页 |
| 3.2.5 柞蚕溶茧酶及突变体表达载体的构建及验证 | 第43-45页 |
| 3.3 结果与分析 | 第45-50页 |
| 3.3.1 柞蚕蛹下颚腺RNA的提取 | 第45-46页 |
| 3.3.2 柞蚕溶茧酶基因全长的克隆 | 第46-47页 |
| 3.3.3 柞蚕溶茧酶突变体基因的克隆 | 第47-48页 |
| 3.3.4 表达载体p-E-G的构建 | 第48-49页 |
| 3.3.5 柞蚕溶茧酶及突变体表达载体的构建及验证 | 第49-50页 |
| 3.4 讨论 | 第50页 |
| 3.5 小结 | 第50-51页 |
| 4 柞蚕溶茧酶及其突变体的表达和活性鉴定 | 第51-65页 |
| 4.1 实验材料和试剂 | 第51-53页 |
| 4.1.1 材料和试剂 | 第51页 |
| 4.1.2 实验设备 | 第51-52页 |
| 4.1.3 主要溶液 | 第52-53页 |
| 4.2 实验方法 | 第53-58页 |
| 4.2.1 p-E-G-C-Bacmid的构建 | 第53-54页 |
| 4.2.2 重组杆状病毒的制备 | 第54-55页 |
| 4.2.3 重组溶茧酶的SDS-PAGE电泳及Western Blot检测 | 第55-57页 |
| 4.2.4 表达产物对纤维蛋白原的降解 | 第57页 |
| 4.2.5 表达产物对纤维蛋白的降解 | 第57-58页 |
| 4.3 结果与分析 | 第58-64页 |
| 4.3.1 重组杆粒的构建及鉴定 | 第58-59页 |
| 4.3.2 溶茧酶基因在Sf9细胞中的表达 | 第59-61页 |
| 4.3.3 柞蚕溶茧酶及其突变体的SDS-PAGE及Westrn Blot检测结果 | 第61-62页 |
| 4.3.4 柞蚕溶茧酶及其突变体的活性检测 | 第62-64页 |
| 4.4 讨论 | 第64页 |
| 4.5 小结 | 第64-65页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-71页 |
| 附录A 英文缩写的中英文全称 | 第71-72页 |
| 附录B 论文所用质粒图谱 | 第72-73页 |
| 附录C 电泳Marker | 第73-74页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第74-75页 |
| 致谢 | 第75-76页 |
