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外源NO对白桦(Betula platyphylla)悬浮细胞三萜合成信号调控机制研究

摘要第4-6页
Abstract第6-8页
1 绪论第12-22页
    1.1 白桦第12页
    1.2 三萜类化合物的合成及生物活性第12-14页
        1.2.1 三萜化合物的合成途径第12-14页
        1.2.2 三萜化合物的生物活性第14页
    1.3 一氧化氮(Nitric oxide)研究进展第14-15页
        1.3.1 植物中NO的来源途径第14-15页
        1.3.2 植物中NO的生理作用第15页
    1.4 活性氧第15-19页
        1.4.1 植物细胞内ROS的来源第16-17页
        1.4.2 植物细胞内ROS的清除系统第17-18页
        1.4.3 植物细胞内ROS的作用第18-19页
    1.5 钙信号第19-20页
        1.5.1 植物细胞内钙的分布和转移系统第19-20页
        1.5.2 Ca~(2+)在植物信号转导中的作用第20页
    1.6 植物细胞凋亡第20-21页
    1.7 本研究的目的意义第21-22页
2 外源NO对白桦三萜合成及抗氧化酶活性的影响第22-43页
    2.1 材料与方法第22-27页
        2.1.1 植物材料培养条件第22页
        2.1.2 外源信号的添加及猝灭第22页
        2.1.3 总三萜的提取与测定第22-23页
        2.1.4 齐墩果酸的提取与测定第23页
        2.1.5 细胞活力的测定第23-24页
        2.1.6 抗逆酶活性的测定第24-25页
        2.1.7 丙二醛(MDA)含量的测定第25页
        2.1.8 脯氨酸含量的测定第25-26页
        2.1.9 Real-time PCR检测第26-27页
    2.2 结果与分析第27-40页
        2.2.1 适用于白桦花药细胞SNP浓度的筛选第27-29页
        2.2.2 施加SNP对白桦细胞齐墩果酸含量的影响第29-30页
        2.2.3 外源NO对细胞活力的影响第30页
        2.2.4 外源NO对白桦细胞抗氧化酶活性的影响第30-34页
        2.2.5 外源NO对白桦细胞内丙二醛(MDA)含量的影响第34-35页
        2.2.6 外源NO对白桦细胞内脯氨酸含量的影响第35-36页
        2.2.7 外源NO对白桦细胞内基因表达量的影响第36-40页
    2.3 讨论第40-42页
    2.4 本章小结第42-43页
3 活性氧在外源NO诱导白桦三萜合成过程中的作用第43-60页
    3.1 材料与方法第43-45页
        3.1.1 植物材料培养条件第43页
        3.1.2 外源信号的添加与淬灭第43页
        3.1.3 细胞内H_2O_2含量测定第43页
        3.1.4 超氧阴离子(O_2~(·-))含量的测定第43-44页
        3.1.5 齐墩果酸提取与测定第44页
        3.1.6 细胞活力的测定第44页
        3.1.7 抗氧化酶活性的测定第44页
        3.1.8 丙二醛含量测定第44页
        3.1.9 脯氨酸含量测定第44页
        3.1.10 Real-time PCR检测第44-45页
    3.2 结果与分析第45-56页
        3.2.1 外源NO对细胞内ROS含量的影响第45-46页
        3.2.2 ROS对NO诱导的白桦齐墩果酸的影响第46-47页
        3.2.3 ROS在NO改变细胞生长状况过程中的作用第47-48页
        3.2.4 ROS在NO改变细胞活力过程中的作用第48-49页
        3.2.5 NO诱导过程中ROS对抗氧化酶活性的影响第49-52页
        3.2.6 NO诱导过程中ROS对丙二醛(MDA)含量的影响第52页
        3.2.7 NO诱导过程中ROS对细胞内游离脯氨酸含量的影响第52-53页
        3.2.8 NO诱导过程中ROS对细胞内相关基因表达的影响第53-56页
    3.3 讨论第56-58页
    3.4 本章小结第58-60页
4 钙信号在外源NO诱导白桦三萜合成中的作用第60-75页
    4.1 材料与方法第60-61页
        4.1.1 植物材料培养条件第60页
        4.1.2 外源信号的添加及淬灭第60页
        4.1.3 胞内钙离子浓度的测定第60页
        4.1.4 齐墩果酸的提取与测定第60页
        4.1.5 细胞活力的测定第60页
        4.1.6 防御酶活性测定第60页
        4.1.7 过氧化氢含量检测第60页
        4.1.8 超氧阴离子含量检测第60页
        4.1.9 丙二醛含量检测第60页
        4.1.10 脯氨酸含量检测第60-61页
        4.1.11 Real-time PCR检测第61页
    4.2 结果与分析第61-73页
        4.2.1 外源NO对白桦细胞内钙离子浓度的影响第61-62页
        4.2.2 Ca~(2+)在NO诱导白桦齐墩果酸合成过程中的作用第62-63页
        4.2.3 Ca~(2+)对NO诱导白桦细胞生长的影响第63-64页
        4.2.4 NO诱导过程中Ca~(2+)对白桦细胞活力的影响第64-65页
        4.2.5 NO诱导过程中Ca~(2+)对抗氧化酶活性的影响第65-68页
        4.2.6 Ca~(2+)对NO诱导的白桦细胞内ROS含量的影响第68-69页
        4.2.7 Ca~(2+)对NO诱导的白桦细胞内丙二醛含量的影响第69-70页
        4.2.8 Ca~(2+)对NO诱导的白桦细胞内游离脯氨酸含量的影响第70页
        4.2.9 Ca~(2+)对NO诱导的白桦细胞内关键基因表达的影响第70-73页
    4.3 讨论第73-74页
    4.4 本章小结第74-75页
5 外源NO诱导过程中细胞凋亡情况的变化第75-84页
    5.1 材料与方法第75页
        5.1.1 植物材料培养条件第75页
        5.1.2 外源信号的添加及淬灭第75页
        5.1.3 吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色测定细胞凋亡第75页
        5.1.4 台盼蓝染色测定细胞死亡率第75页
    5.2 结果与分析第75-81页
        5.2.1 外源NO诱导过程中白桦细胞凋亡水平的变化情况第75-79页
        5.2.2 ROS在外源NO诱导细胞凋亡过程中的作用第79-80页
        5.2.3 Ca~(2+)在外源NO诱导细胞凋亡过程中的作用第80-81页
    5.3 讨论第81-83页
    5.4 本章小结第83-84页
结论第84-86页
参考文献第86-94页
附录第94-97页
攻读学位期间发表的学术论文第97-98页
致谢第98-99页

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