| 摘要 | 第10-12页 |
| ABSTRACT | 第12-13页 |
| 符号说明 | 第14-15页 |
| 第一部分 前言 | 第15-32页 |
| 1. 引言 | 第15-16页 |
| 2. 类胡萝卜素简介 | 第16-18页 |
| 2.1 类胡萝卜素的分布 | 第16页 |
| 2.2 类胡萝卜素的结构 | 第16-17页 |
| 2.3 类胡萝卜素的功能 | 第17-18页 |
| 3. 虾青素简介 | 第18-22页 |
| 3.1 虾青素的结构 | 第19页 |
| 3.2 虾青素的来源 | 第19-21页 |
| 3.3 虾青素的功能 | 第21-22页 |
| 3.4 天然虾青素的生物安全性 | 第22页 |
| 4. 藻类简介 | 第22-28页 |
| 4.1 藻类基因工程 | 第23-24页 |
| 4.2 雨生红球藻 | 第24-26页 |
| 4.3 集胞藻PCC6803概述 | 第26-27页 |
| 4.4 集胞藻PCC6803的遗传特点及研究进展 | 第27-28页 |
| 5. 转化方法的探究 | 第28-30页 |
| 6. 本研究的目的、意义及实验设计 | 第30-32页 |
| 6.1 本论文的研究目的及意义 | 第30-31页 |
| 6.2 实验设计 | 第31-32页 |
| 第二部分 实验 | 第32-76页 |
| 1. 实验材料 | 第32-38页 |
| 1.1 藻种及器材 | 第32页 |
| 1.2 引物序列 | 第32-33页 |
| 1.3 载体和菌种 | 第33页 |
| 1.4 培养基基本配方及培养条件 | 第33-34页 |
| 1.5 实验中用到的酶、化学试剂及抗体 | 第34-35页 |
| 1.6 主要仪器及型号 | 第35-36页 |
| 1.7 实验中所用溶液 | 第36-38页 |
| 2. 实验方法 | 第38-53页 |
| 2.1 藻株纯化 | 第38-39页 |
| 2.2 雨生红球藻RNA提取 | 第39页 |
| 2.3 反转录cDNA第一链的合成 | 第39-40页 |
| 2.4 集胞藻PCC6803基因组的提取 | 第40-41页 |
| 2.5 目的基因的克隆 | 第41-45页 |
| 2.5.1 启动子psbA2的克隆 | 第41页 |
| 2.5.2 β-胡萝卜素羟化酶和β-胡萝卜素酮化酶的克隆及分析 | 第41-42页 |
| 2.5.3 启动子与目的基因的融合PCR | 第42-43页 |
| 2.5.4 琼脂糖凝胶DNA回收 | 第43页 |
| 2.5.5 片段与T载体连接 | 第43页 |
| 2.5.6 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第43-44页 |
| 2.5.7 质粒提取 | 第44-45页 |
| 2.6 集胞藻PCC6803表达载体构建 | 第45-47页 |
| 2.6.1 质粒酶切 | 第45页 |
| 2.6.2 连接 | 第45-46页 |
| 2.6.3 Bkt/CRTR-B基因表达载体构建 | 第46-47页 |
| 2.7 集胞藻PCC6803转化 | 第47-48页 |
| 2.8 转化子抗生素筛选和PCR筛选 | 第48-49页 |
| 2.9 半定量及荧光定量 | 第49页 |
| 2.10 Western blot检测基因的蛋白表达水平 | 第49-52页 |
| 2.10.1 总蛋白的提取 | 第50页 |
| 2.10.2 SDS-Page胶的配制 | 第50-51页 |
| 2.10.3 Western blot | 第51-52页 |
| 2.11 虾青素HPLC检测 | 第52-53页 |
| 2.12 生长曲线的的测定 | 第53页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第53-74页 |
| 3.1 藻株纯化 | 第53-54页 |
| 3.2 目的基因的克隆 | 第54-56页 |
| 3.3 目的基因序列的分析 | 第56-60页 |
| 3.4 菌液PCR结果 | 第60-62页 |
| 3.5 测序结果 | 第62-64页 |
| 3.6 酶切结果 | 第64-66页 |
| 3.7 筛选结果 | 第66-73页 |
| 3.7.1 PCR筛选 | 第66-67页 |
| 3.7.2 半定量及荧光定量结果分析 | 第67-68页 |
| 3.7.3 Western blot结果与分析 | 第68-69页 |
| 3.7.4 HPLC检测转化子中虾青素的表达 | 第69-73页 |
| 3.8 集胞藻PCC6803生长曲线的比较 | 第73-74页 |
| 4. 结论 | 第74-76页 |
| 参考文献 | 第76-82页 |
| 致谢 | 第82-83页 |
| 学位论文评阅及答辩倩况表 | 第83页 |