| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 绪论 | 第12-21页 |
| 1.1 问题的提出及意义 | 第12-13页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第13-19页 |
| 1.2.2 恶性黑色素瘤的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.3 血红素氧合酶-1 与肿瘤的关系 | 第15-16页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤中的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.5 PI3K信号通路与肿瘤的发生发展 | 第17-19页 |
| 1.3 本文的研究内容 | 第19页 |
| 1.3.1 研究目的 | 第19页 |
| 1.3.2 主要研究内容 | 第19页 |
| 1.4 本文的创新点 | 第19-21页 |
| 2 干扰与过表达HO-1 对黑色素瘤细胞增殖凋亡的影响 | 第21-44页 |
| 2.1 引言 | 第21-22页 |
| 2.2 实验材料 | 第22-25页 |
| 2.2.1 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.2.2 实验试剂及耗材 | 第23页 |
| 2.2.3 相关试剂的配置 | 第23-25页 |
| 2.3 相关实验方法 | 第25-35页 |
| 2.3.1 细胞的培养 | 第25-26页 |
| 2.3.2 目的基因DNA片段的提取 | 第26-28页 |
| 2.3.3 慢病毒载体构建与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.3.4 慢病毒包装与稳定细胞系的建立 | 第30-31页 |
| 2.3.5 Western Blot检测HO-1 蛋白表达 | 第31-33页 |
| 2.3.6 细胞免疫荧光实验检测HO-1 的表达 | 第33-34页 |
| 2.3.7 CCK8检测细胞增殖 | 第34页 |
| 2.3.8 克隆形成实验检测细胞增殖 | 第34页 |
| 2.3.9 流式细胞术检测细胞周期与凋亡 | 第34页 |
| 2.3.10 划痕实验检测细胞迁移 | 第34-35页 |
| 2.3.11 裸鼠成瘤实验检测肿瘤生长情况 | 第35页 |
| 2.4 相关实验结果 | 第35-43页 |
| 2.4.1 PCR扩增结果 | 第35-36页 |
| 2.4.2 Western Blot及细胞免疫荧光检测HO-1 的表达 | 第36-37页 |
| 2.4.3 CCK8及克隆形成检测细胞增殖 | 第37-38页 |
| 2.4.4 HO-1 干扰和过表达对A375细胞周期凋亡的影响 | 第38-41页 |
| 2.4.5 划痕实验检测细胞迁移 | 第41-42页 |
| 2.4.6 裸鼠成瘤实验检测肿瘤生长情况 | 第42-43页 |
| 2.5 讨论 | 第43-44页 |
| 3 HO-1 敲除抑制黑色素瘤细胞增殖、促进细胞凋亡 | 第44-58页 |
| 3.1 引言 | 第44页 |
| 3.2 实验材料 | 第44-47页 |
| 3.2.1 实验仪器及设备 | 第44-45页 |
| 3.2.2 实验试剂及耗材 | 第45-46页 |
| 3.2.3 相关试剂的配置 | 第46-47页 |
| 3.3 相关实验方法 | 第47-48页 |
| 3.3.1.细胞的培养 | 第47页 |
| 3.3.2 目的基因DNA片段的提取 | 第47页 |
| 3.3.3 慢病毒载体构建与包装 | 第47页 |
| 3.3.4 CRISPR/Cas9系统基因编辑方案 | 第47-48页 |
| 3.3.5 Western Blot检测HO-1 蛋白的表达 | 第48页 |
| 3.3.6 CCK8检测细胞增殖 | 第48页 |
| 3.3.7 克隆形成实验检测细胞增殖 | 第48页 |
| 3.3.8 流式细胞术检测细胞周期和凋亡 | 第48页 |
| 3.3.9 划痕实验检测细胞迁移 | 第48页 |
| 3.3.10 裸鼠成瘤实验肿瘤生长情况 | 第48页 |
| 3.4 相关实验结果 | 第48-56页 |
| 3.4.1 HO1/-测序分析 | 第48-49页 |
| 3.4.2 Western Blot检测HO-1 敲除效率 | 第49页 |
| 3.4.3 CCK8及克隆形成检测HO-1 敲除后细胞增殖变化 | 第49-50页 |
| 3.4.4 细胞周期凋亡的检测 | 第50-53页 |
| 3.4.5 划痕实验检测细胞迁移 | 第53-54页 |
| 3.4.6 HO-1 敲除抑制裸鼠肿瘤生长 | 第54-55页 |
| 3.4.7 HO-1 敲除调控黑色素瘤生长的作用机制 | 第55-56页 |
| 3.5 讨论 | 第56-58页 |
| 4 结论与展望 | 第58-59页 |
| 4.1 本研究的主要结论 | 第58页 |
| 4.2 研究展望 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
