| 致谢 | 第7-8页 |
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述与研究背景 | 第15-28页 |
| 1.1 引言 | 第15-16页 |
| 1.2 基因表达抑制研究技术及其在抗病性中的应用 | 第16-18页 |
| 1.2.1 病毒诱导的基因沉默技术及其在鉴定植物基因功能中的应用 | 第16-17页 |
| 1.2.2 RNAi及其在鉴定植物基因功能中的应用 | 第17-18页 |
| 1.3 内源性非蛋白质编码小RNA概述 | 第18-19页 |
| 1.3.1 植物体内小RNA作用机制 | 第18-19页 |
| 1.4 植物DCL(Dicer-like)基因功能研究 | 第19-26页 |
| 1.4.1 Dicer和DCL结构 | 第20-23页 |
| 1.4.2 Dicer和DCL的作用机理 | 第23-24页 |
| 1.4.3 Dicer和DCL对植物生长发育的调控作用 | 第24-25页 |
| 1.4.4 Dicer和DCL在植物抗病调控中的作用 | 第25-26页 |
| 1.5 本研究的意义和主要研究内容 | 第26-28页 |
| 第二章 适用于烟草转化的DCL基因RNAi载体构建 | 第28-38页 |
| 前言 | 第28页 |
| 2.1 材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 供试菌株与载体 | 第28-29页 |
| 2.1.2 酶、化学试剂 | 第29页 |
| 2.1.3 常用试剂的配制 | 第29页 |
| 2.2 方法 | 第29-31页 |
| 2.2.1 重组质粒的提取与鉴定 | 第29页 |
| 2.2.2 重组质粒PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.2.3 质粒和PCR产物的双酶切及酶切产物割胶回收与纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.4 连接产物转化大肠杆菌DH10B | 第31页 |
| 2.2.5 重组质粒的筛选与鉴定 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-37页 |
| 2.3.1 DCL基因RNAi发夹结构的构建 | 第31-36页 |
| 2.3.2 DCL基因双元表达载体的构建 | 第36-37页 |
| 2.4 讨论 | 第37-38页 |
| 2.4.1 烟草DCL基因RNAi片段序列 | 第37页 |
| 2.4.2 RNAi发夹结构的构建 | 第37-38页 |
| 第三章 烟草DCL基因RANi转基因植株的获得 | 第38-53页 |
| 前言 | 第38页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 转化的受体植物 | 第38页 |
| 3.1.2 菌株与质粒 | 第38页 |
| 3.1.3 培养基与试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-42页 |
| 3.2.1 烟草叶片感染与卡那抗性植株的再生 | 第39页 |
| 3.2.2 烟草基因组RNA的提取 | 第39-40页 |
| 3.2.3 烟草基因组DNA的提取 | 第40-41页 |
| 3.2.4 转基因植株阳性鉴定 | 第41页 |
| 3.2.5 实时荧光定量PCR检测烟草DCL基因沉默效果 | 第41-42页 |
| 3.3 结果与分析 | 第42-45页 |
| 3.3.1 卡那霉素抗性NtDCL基因RNAi普通烟植株的获得 | 第42-43页 |
| 3.3.2 所获烟草NtDCL基因RNAi株系的阳性鉴定 | 第43-44页 |
| 3.3.3 转基因烟草烟草DCL基因沉默效果 | 第44页 |
| 3.3.4 不同NtDCL基因RNAi株系的生长差异 | 第44页 |
| 3.3.5 转基因T1代种子Kan播种筛选 | 第44-45页 |
| 3.4 讨论 | 第45-53页 |
| 3.4.1 影响转化效率的主要因素 | 第45页 |
| 3.4.2 筛选剂的选择 | 第45-46页 |
| 3.4.3 DCL基因对植物生长发育的调控作用 | 第46-53页 |
| 第四章 烟草DCL基因的抗病调控功能分析 | 第53-65页 |
| 前言 | 第53页 |
| 4.1 材料 | 第53-54页 |
| 4.1.1 供试植物 | 第53页 |
| 4.1.2 化学试剂与培养基 | 第53页 |
| 4.1.3 供试病原菌 | 第53-54页 |
| 4.2 方法 | 第54-55页 |
| 4.2.1 实时荧光定量PCR检测烟草DCL基因表达量 | 第54页 |
| 4.2.2 烟草DCL基因RANi瞬时沉默处理 | 第54页 |
| 4.2.3 Cf-4/Avr4介导的HR检验 | 第54-55页 |
| 4.2.4 水稻白叶枯菌(Xoo)介导的HR检验 | 第55页 |
| 4.2.5 烟草野火病菌(Pst)接种 | 第55页 |
| 4.2.6 核盘菌(Ss)接种 | 第55页 |
| 4.3 结果与分析 | 第55-58页 |
| 4.3.1 DCL基因在本氏烟和普通烟不同组织中的差异表达 | 第55-56页 |
| 4.3.2 本氏烟和普通烟DCL基因RANi瞬时沉默 | 第56页 |
| 4.3.3 DCL基因对Cf-4/Avr4和Xoo介导的过敏性反应的调控作用 | 第56-57页 |
| 4.3.4 DCL基因对烟草野火病菌(Pst)的调控作用 | 第57-58页 |
| 4.3.5 DCL基因对菌核病菌(Ss)的调控作用 | 第58页 |
| 4.4 讨论 | 第58-65页 |
| 4.4.1 DCL基因组织特异性表达 | 第58-59页 |
| 4.4.2 DCL基因在抗病调控中的作用 | 第59页 |
| 4.4.3 农杆菌在植物抗病调控中的作用 | 第59-65页 |
| 全文小结 | 第65-67页 |
| 参考文献 | 第67-72页 |
| 附录 | 第72-78页 |
