| 中文摘要 | 第6-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩写 | 第11-12页 |
| 第一章 前言 | 第12-24页 |
| 一、环境中的抗生素 | 第12-13页 |
| 二、新型环境污染物—抗生素抗性基因 | 第13-16页 |
| (一) ARGs储存库的形成 | 第14页 |
| (二) ARGs的传播扩散途径 | 第14-16页 |
| 三、喹诺酮类抗生素概述 | 第16-18页 |
| (一) 喹诺酮类抗生素的分类 | 第16-17页 |
| (二) 喹诺酮类抗生素的作用机制 | 第17-18页 |
| (三) 喹诺酮类抗生素的使用 | 第18页 |
| 四、质粒介导的喹诺酮抗性基因 | 第18-20页 |
| (一) PMQR基因的分类及其耐药机制 | 第19页 |
| (二) PMQR基因的流行 | 第19-20页 |
| 五、有机肥源抗生素污染的研究 | 第20页 |
| 六、抗生素和ARGs向植物传播的研究 | 第20-21页 |
| 七、本论文的研究思路 | 第21-24页 |
| 第二章 有机肥中典型抗生素残留测定及相关ARGs检测 | 第24-38页 |
| 1 实验材料 | 第24-28页 |
| 1.1 供试材料 | 第24-25页 |
| 1.2 药品试剂 | 第25页 |
| 1.3 仪器设备 | 第25-26页 |
| 1.4 溶液及培养基配制 | 第26页 |
| 1.5 酶及引物 | 第26-27页 |
| 1.6 其他材料 | 第27页 |
| 1.7 菌株培养与保藏 | 第27-28页 |
| 2 实验方法 | 第28-30页 |
| 2.1 有机肥中四类典型抗生素残留的同时测定 | 第28-30页 |
| 2.1.1 样品前处理 | 第28页 |
| 2.1.2 UPLC-MS/MS检测 | 第28-30页 |
| 2.2 有机肥DNA的提取及抗性基因检测 | 第30页 |
| 2.2.1 有机肥DNA的提取 | 第30页 |
| 2.2.2 ARGs检测 | 第30页 |
| 3 结果与分析 | 第30-36页 |
| 3.1 有机肥中抗生素的检测 | 第30-33页 |
| 3.1.1 线性方程和检出限 | 第30-32页 |
| 3.1.2 南京市售有机肥中4类抗生素检测 | 第32-33页 |
| 3.2 有机肥DNA提取及ARGs测定 | 第33-36页 |
| 3.2.1 有机肥DNA提取方法的优化 | 第33-35页 |
| 3.2.2 ARGs的检测 | 第35-36页 |
| 4 讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 土壤中添加思诺沙星对生菜内生细菌抗性基因qnrA、qnrB的影响 | 第38-68页 |
| 第一节 PMQR基因阳性克隆构建与qPCR方法的建立 | 第38-48页 |
| 1 实验材料 | 第38-40页 |
| 1.1 菌种和质粒 | 第38页 |
| 1.2 药品试剂 | 第38-39页 |
| 1.3 仪器设备 | 第39页 |
| 1.4 溶液和培养基配制 | 第39-40页 |
| 1.5 酶及引物 | 第40页 |
| 1.6 其他材料 | 第40页 |
| 1.7 菌株培养与保藏 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-44页 |
| 2.1 阳性克隆的构建 | 第40-43页 |
| 2.1.1 目的DNA的扩增 | 第40-41页 |
| 2.1.2 PCR产物纯化回收 | 第41-42页 |
| 2.1.3 PCR产物装TA克隆 | 第42页 |
| 2.1.4 感受态细胞制备及转化 | 第42-43页 |
| 2.1.5 阳性克隆的筛选及双酶切验证 | 第43页 |
| 2.1.6 PCR扩增与测序验证 | 第43页 |
| 2.2 荧光实时定量PCR反应 | 第43-44页 |
| 2.2.1 qPCR方法 | 第43-44页 |
| 2.2.2 qPCR标准曲线 | 第44页 |
| 3 结果与分析 | 第44-48页 |
| 3.1 阳性克隆的筛选 | 第44-45页 |
| 3.2 qPCR方法 | 第45-48页 |
| 第二节 生菜盆栽试验及相关数据测定 | 第48-68页 |
| 1 实验材料 | 第48-51页 |
| 1.1 供试材料 | 第48页 |
| 1.2 药品试剂 | 第48-49页 |
| 1.3 仪器设备 | 第49页 |
| 1.4 溶液及培养基配制 | 第49-50页 |
| 1.5 酶及引物 | 第50页 |
| 1.6 其他材料 | 第50-51页 |
| 1.7 菌株培养与保藏 | 第51页 |
| 2 实验方法 | 第51-56页 |
| 2.1 实验设计 | 第51-52页 |
| 2.2 化学分析方法 | 第52-53页 |
| 2.2.1 土壤中恩诺沙星及环丙沙星的提取 | 第52页 |
| 2.2.2 生菜中恩诺沙星及环丙沙星的提取 | 第52-53页 |
| 2.2.3 UPLC-MS/MS检测 | 第53页 |
| 2.3 抗性基因的定量 | 第53-54页 |
| 2.3.1 土壤DNA的提取 | 第53页 |
| 2.3.2 生菜叶片内生细菌的富集及DNA的提取 | 第53-54页 |
| 2.3.3 qPCR定量 | 第54页 |
| 2.4 内生细菌的分离和鉴定 | 第54-56页 |
| 2.4.1 内生细菌分离 | 第54页 |
| 2.4.2 内生细菌菌种鉴定 | 第54-55页 |
| 2.4.3 抗生素敏感性实验 | 第55-56页 |
| 2.5 数据统计和分析 | 第56页 |
| 3 结果与分析 | 第56-66页 |
| 3.1 土壤和生菜中的恩诺沙星及环丙沙星 | 第56-57页 |
| 3.1.1 检测限与定量限 | 第56-57页 |
| 3.1.2 检测结果 | 第57页 |
| 3.2 土壤和生菜叶片内生细菌的PMQR基因的定量检测 | 第57-62页 |
| 3.2.1 qPCR引物 | 第57页 |
| 3.2.2 qPCR检测限 | 第57页 |
| 3.2.3 检测结果 | 第57-62页 |
| 3.3 生菜内生细菌菌种鉴定和耐药性 | 第62-66页 |
| 3.3.1 内生细菌计数 | 第62页 |
| 3.3.2 菌种鉴定 | 第62-63页 |
| 3.3.3 药敏试验 | 第63-65页 |
| 3.3.4 耐药性细菌的PMQR基因扩增 | 第65-66页 |
| 4 讨论 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 创新和不足之处 | 第77-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 附件 | 第79-82页 |
