| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 文中常用缩略词 | 第8-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-21页 |
| 1 产蛋下降综合征的历史 | 第13-14页 |
| 2 病原学特性 | 第14页 |
| 3 流行病学 | 第14-16页 |
| 3.1 流行特点 | 第15页 |
| 3.2 症状 | 第15页 |
| 3.3 预防措施 | 第15-16页 |
| 4 鸭腺病毒检测方法 | 第16-19页 |
| 4.1 常规检测方法 | 第16页 |
| 4.2 分子生物学检测 | 第16-17页 |
| 4.2.1 聚合酶链式反应(PCR)检测 | 第16-17页 |
| 4.2.2 分子探针和胶体金技术 | 第17页 |
| 4.3 免疫学检测方法 | 第17-19页 |
| 4.3.1 血凝抑制实验(HI) | 第17-18页 |
| 4.3.2 琼脂扩散(AGP)试验 | 第18页 |
| 4.3.3 中和试验(SN) | 第18页 |
| 4.3.4 酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第18-19页 |
| 5 腺病毒作为活载体在医疗上的应用 | 第19-20页 |
| 6 研究目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 检测鸭腺病毒抗原夹心间接ELISA法的建立 | 第21-39页 |
| 1 实验材料 | 第21-23页 |
| 1.1 实验毒株、菌株 | 第21页 |
| 1.2 实验动物 | 第21页 |
| 1.3 试验耗材及主要仪器 | 第21-22页 |
| 1.4 实验试剂 | 第22页 |
| 1.5 实验溶液的配制 | 第22-23页 |
| 2 实验方法 | 第23-29页 |
| 2.0 产蛋下降综合征种毒的复苏 | 第23页 |
| 2.1 产蛋下降综合征病毒的鉴定 | 第23-25页 |
| 2.1.1 HI实验鉴定 | 第23-24页 |
| 2.1.2 PCR实验鉴定 | 第24-25页 |
| 2.2 EDS_(76)的传代培养 | 第25页 |
| 2.3 EDS_(76)的浓缩和纯化 | 第25-26页 |
| 2.4 鸭抗EDS_(76)高免血清的制备 | 第26页 |
| 2.5 兔抗EDS_(76)高免血清的制备 | 第26页 |
| 2.6 鸭抗、兔抗EDS_(76)血清效价测定 | 第26页 |
| 2.7 鸭抗EDS_(76)、兔抗EDS_(76)免疫球蛋白IGG的提取 | 第26-27页 |
| 2.7.1 饱和硫酸铵法提纯IgG | 第26-27页 |
| 2.7.2 辛酸-硫酸铵法提纯IgG | 第27页 |
| 2.8 夹心间接ELISA条件 | 第27-29页 |
| 2.8.1 鸭抗EDS_(76)和兔抗EDS_(76)浓度的选择(方阵实验) | 第27-28页 |
| 2.8.2 羊抗兔酶标抗体浓度筛选 | 第28页 |
| 2.8.3 封闭液筛选 | 第28页 |
| 2.8.4 包被时间的筛选 | 第28页 |
| 2.8.5 封闭时间筛选 | 第28页 |
| 2.8.6 EDS_(76)抗原与鸭抗作用时间筛选 | 第28页 |
| 2.8.7 鸭抗与EDS_(76)抗原作用时间筛选 | 第28页 |
| 2.8.8 酶标羊抗兔抗体作用时间筛选 | 第28-29页 |
| 2.8.9 TMB显色液显色时间筛选 | 第29页 |
| 2.9 临界值的确定 | 第29页 |
| 2.10 特异性实验 | 第29页 |
| 2.10.1 特异性阻断试验 | 第29页 |
| 2.10.2 交叉性试验 | 第29页 |
| 2.10.3 重复性试验 | 第29页 |
| 2.11 敏感性试验 | 第29页 |
| 3 实验结果 | 第29-36页 |
| 3.1 EDS_(76)复苏、鉴定和传代培养 | 第29-30页 |
| 3.2 鸭抗EDS_(76)血清、兔抗EDS_(76)血清测定结果 | 第30页 |
| 3.3 鸭抗、兔抗EDS_(76)血清IGG提纯测定结果 | 第30-31页 |
| 3.4 抗体夹心法ELISA最佳条件筛选 | 第31-34页 |
| 3.4.1 鸭抗EDS_(76)和兔抗EDS_(76)最佳工作浓度筛选 | 第31-32页 |
| 3.4.2 羊抗兔酶标抗体最佳作用浓度筛选结果 | 第32页 |
| 3.4.3 封闭液浓度筛选结果 | 第32-33页 |
| 3.4.4 包被时间筛选结果 | 第33页 |
| 3.4.5 封闭液封闭时间筛选结果 | 第33页 |
| 3.4.6 抗原作用时间筛选结果 | 第33页 |
| 3.4.7 兔抗EDS_(76) IgG作用时间筛选结果 | 第33-34页 |
| 3.4.8 酶标抗体作用时间的筛选结果 | 第34页 |
| 3.4.9 TMB显色液作用时间筛选结果 | 第34页 |
| 3.5 临界值的确定结果 | 第34-35页 |
| 3.6 特异性试验结果 | 第35页 |
| 3.6.1 阻断实验结果 | 第35页 |
| 3.6.2 交叉性试验结果 | 第35页 |
| 3.6.3 重复性试验结果 | 第35页 |
| 3.7 敏感性实验结果 | 第35-36页 |
| 4 分析和讨论 | 第36-38页 |
| 4.1 鸭抗EDS_(76)血清和兔抗EDS_(76)血清的制备 | 第36页 |
| 4.2 鸭抗EDS_(76)IGG、兔抗EDS_(76) IGG的提取 | 第36页 |
| 4.3 夹心间接ELISA方法的建立 | 第36-37页 |
| 4.4 影响ELISA检测的因素 | 第37-38页 |
| 5 小结 | 第38-39页 |
| 第三章 检测鸭腺病毒抗原夹心间接法ELISA的应用 | 第39-47页 |
| 1 实验材料 | 第39-40页 |
| 1.1 毒株 | 第39页 |
| 1.2 实验动物 | 第39页 |
| 1.3 实验器材 | 第39页 |
| 1.4 溶液的配制 | 第39-40页 |
| 1.5 样品的采集 | 第40页 |
| 2 实验方法 | 第40-43页 |
| 2.1 样品的处理 | 第40页 |
| 2.2 夹心间接ELISA检测样品 | 第40-41页 |
| 2.3 凝和血凝抑制实验检测样品 | 第41-42页 |
| 2.3.1 样品血凝价的测定 | 第41页 |
| 2.3.2 有红细胞凝集现象样品HI实验测定 | 第41-42页 |
| 2.4 PCR实验检测样品 | 第42页 |
| 2.5 人工感染产蛋鸭的动物实验 | 第42-43页 |
| 2.5.1 动物攻毒实验 | 第42页 |
| 2.5.2 人工感染产蛋鸭的抗体检测 | 第42-43页 |
| 2.5.3 人工感染产蛋鸭各组织带毒检测 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-45页 |
| 3.1 夹心间接ELISA检测样品结果 | 第43页 |
| 3.2 HA和HI实验检测样品结果 | 第43-44页 |
| 3.3 PCR实验检测样品结果 | 第44页 |
| 3.4 人工感染产蛋鸭的实验结果 | 第44-45页 |
| 3.4.1 动物攻毒实验结果 | 第44-45页 |
| 3.4.2 人工感染产蛋鸭的抗体检测 | 第45页 |
| 3.4.3 人工感染产蛋鸭各组织带毒检测结果 | 第45页 |
| 4 分析和讨论 | 第45-47页 |
| 5 小节 | 第47页 |
| 全文结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 攻读硕士间发表的论文 | 第55页 |
