| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 前言 | 第11-12页 |
| 综述 | 第12-28页 |
| 第一章 细胞系建立的研究进展 | 第12-24页 |
| 1.1 细胞系（株）的资源状况 | 第12-14页 |
| 1.2 几种著名的细胞株（系） | 第14-17页 |
| 1.2.1 海拉细胞（Hela Cell） | 第14-15页 |
| 1.2.2 非洲绿猴肾细胞（Vero Cell） | 第15-16页 |
| 1.2.3 狗肾细胞（MDCK）及其他常用细胞系 | 第16-17页 |
| 1.3 细胞的培养及永生化 | 第17-24页 |
| 1.3.1 细胞的发现与细胞培养 | 第17-18页 |
| 1.3.2 动物肾小管上皮细胞的分离培养 | 第18-19页 |
| 1.3.3 细胞的永生化 | 第19-24页 |
| 1.3.3.1 端粒与细胞永生化 | 第19-20页 |
| 1.3.3.2 猿猴病毒（SV40）与细胞的永生化 | 第20-21页 |
| 1.3.3.3 人乳头瘤病毒（HPV）与细胞永生化 | 第21页 |
| 1.3.3.4 其他病毒 | 第21页 |
| 1.3.3.5 癌基因与细胞永生化 | 第21-22页 |
| 1.3.3.6 其他的物理、化学因素导致的细胞永生化 | 第22页 |
| 1.3.3.7 几种永生化效率的对比 | 第22-24页 |
| 第二章 牦牛研究与牦牛细胞系 | 第24-28页 |
| 2.1 以特色占据主导地位的牦牛研究历程 | 第24-25页 |
| 2.2 牦牛细胞与牦牛细胞系 | 第25-26页 |
| 2.3 永生化牦牛肾上皮细胞系的用途 | 第26页 |
| 2.4 技术路线 | 第26-28页 |
| 试验研究 | 第28-63页 |
| 第三章 原代牦牛肾小管细胞培养 | 第28-42页 |
| 3.1 材料与方法 | 第28-34页 |
| 3.1.1 样品的采集 | 第28页 |
| 3.1.2 实验仪器 | 第28页 |
| 3.1.3 主要试剂的配制及保存 | 第28-29页 |
| 3.1.4 肾小管上皮细胞的分离培养 | 第29-30页 |
| 3.1.5 肾小管上皮细胞的传代及纯化 | 第30-31页 |
| 3.1.6 肾小管上皮细胞的冻存与复苏 | 第31页 |
| 3.1.7 肾小管上皮细胞生长曲线测定 | 第31-32页 |
| 3.1.8 肾小管上皮细胞的CK18鉴定 | 第32-33页 |
| 3.1.9 细胞的角蛋白相对含量测定 | 第33-34页 |
| 3.1.10 Westernbolt | 第34页 |
| 3.2 结果与分析 | 第34-40页 |
| 3.2.1 三种原代细胞培养方法获得细胞的形态观察 | 第34-35页 |
| 3.2.2 三种原代培养方法获得的F1代细胞CK-18 检测 | 第35-37页 |
| 3.2.3 上皮细胞的纯化 | 第37-40页 |
| 3.2.3.1 纯化细胞形态观察 | 第37-38页 |
| 3.2.3.2 细胞的生长曲线测定 | 第38页 |
| 3.2.3.3 细胞免疫组化鉴定获得的上皮细胞 | 第38-39页 |
| 3.2.3.4 肾小管上皮细胞标志物检测 | 第39-40页 |
| 3.3 讨论 | 第40-41页 |
| 3.4 小结 | 第41-42页 |
| 第四章 牦牛肾小管上皮细胞的永生化 | 第42-53页 |
| 4.1 材料与方法 | 第42-47页 |
| 4.1.1 细胞与菌株 | 第42页 |
| 4.1.2 试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 方法 | 第42-47页 |
| 4.1.3.1 质粒菌的扩增 | 第42页 |
| 4.1.3.2 质粒的提取与浓缩 | 第42-43页 |
| 4.1.3.3 RNA的提取 | 第43页 |
| 4.1.3.4 HPV-16E6E7融合蛋白基因表达检测 | 第43页 |
| 4.1.3.5 反转录cDNA和PCR反应 | 第43-44页 |
| 4.1.3.6 胶回收 | 第44页 |
| 4.1.3.7 肾小管上皮细胞的转染 | 第44-45页 |
| 4.1.3.8 对转染效率的分析 | 第45-46页 |
| 4.1.3.9 目的细胞的筛选 | 第46页 |
| 4.1.3.10 数据的统计与分析 | 第46-47页 |
| 4.2 结果 | 第47-51页 |
| 4.2.1 质粒的测序与扩增 | 第47-49页 |
| 4.2.2 转染效率分析 | 第49-50页 |
| 4.2.2.1 EGFP转染效率的表观观测 | 第49-50页 |
| 4.2.2.2 各质粒-脂质体配比下的EGFP的荧光量差异比较 | 第50页 |
| 4.2.3 目的基因的相对定量检测 | 第50-51页 |
| 4.2.4 目标细胞的筛选与扩增 | 第51页 |
| 4.3 讨论 | 第51-52页 |
| 4.4 小结 | 第52-53页 |
| 第五章 牦牛永生化肾小管上皮细胞鉴定 | 第53-62页 |
| 5.1 材料与方法 | 第53-54页 |
| 5.1.1 试剂与耗材 | 第53页 |
| 5.1.2 方法 | 第53-54页 |
| 5.1.2.1 目的基因的定性检测 | 第53页 |
| 5.1.2.2 细胞的极限传代实验 | 第53-54页 |
| 5.1.2.3 细胞角蛋白含量稳定实验 | 第54页 |
| 5.1.2.4 裸鼠致瘤实验 | 第54页 |
| 5.2 结果 | 第54-60页 |
| 5.2.1 永生化肾小管上皮细胞与原培养上皮细胞形态观察 | 第54-55页 |
| 5.2.2 生长曲线测定 | 第55-56页 |
| 5.2.3 目的基因的表达结果 | 第56页 |
| 5.2.4 CK18相对含量与上皮稳定性 | 第56-57页 |
| 5.2.5 永生化肾小管上皮细胞的功能鉴定 | 第57-58页 |
| 5.2.6 裸鼠致瘤实验 | 第58-59页 |
| 5.2.7 永生化细胞的极限传代实验 | 第59页 |
| 5.2.8 永生化细胞的命名 | 第59-60页 |
| 5.3 讨论 | 第60页 |
| 5.4 小结 | 第60-62页 |
| 第六章 创新点及不足 | 第62-63页 |
| 6.1 创新点 | 第62页 |
| 6.2 不足之处 | 第62-63页 |
| 结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 附录：研究生阶段发表的论文 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
