| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 缩略语的中英文对照 | 第9-10页 |
| 引言 | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-32页 |
| 第一章 肌肉生长抑制素(Myostatin)基因的研究进展 | 第12-20页 |
| 1. 肌肉生长抑制素基因的发现过程 | 第12-15页 |
| ·"双肌"(double-muscling)现象与肌肉肥大(muscular hypertrophy) | 第12-13页 |
| ·调控组织生长发育的因子——抑制素假说(The chalone hypothesis) | 第13-14页 |
| ·Myostatin的发现 | 第14-15页 |
| 2. Myostatin基因的结构及染色体定位 | 第15-17页 |
| ·Myostatin基因结构和蛋白结构 | 第15-16页 |
| ·Myostatin基因的染色体定位 | 第16-17页 |
| 3. Myostatin在各组织器官的表达规律 | 第17页 |
| 4. 肌肉生长抑制素基因的应用 | 第17-18页 |
| 5. 结论 | 第18-20页 |
| 第二章 RNAi研究进展 | 第20-32页 |
| 1. RNAi的发现 | 第20-21页 |
| 2. RNAi现象的发生机制 | 第21-24页 |
| ·siRNA诱导的PTGS | 第22-23页 |
| ·内源的microRNA通路 | 第23-24页 |
| ·siRNA诱导的TGS | 第24页 |
| 3. siRNA导入方法 | 第24-29页 |
| ·非病毒载体的导入方法 | 第25-28页 |
| ·借助病毒载体导入 | 第28-29页 |
| 4. 结论 | 第29-32页 |
| 第二部分 实验研究 | 第32-60页 |
| 第三章 靶向猪Myostatin基因的shRNA设计及表达载体构建 | 第32-40页 |
| 1. 材料与仪器 | 第32-33页 |
| ·菌种及试剂 | 第32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| 2. 实验方法 | 第33-37页 |
| ·靶向猪Myostatin基因的shRNA设计 | 第33页 |
| ·DNA片段与载体片段的连接 | 第33-34页 |
| ·质粒DNA的转化 | 第34页 |
| ·质粒的快速鉴定 | 第34-35页 |
| ·质粒小量制备提取 | 第35页 |
| ·DNA的胶回收 | 第35-36页 |
| ·质粒的酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·质粒测序及结果比对分析 | 第37页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第37-38页 |
| ·靶向猪Myostatin基因的shRNA设计 | 第37-38页 |
| ·shRNA表达载体的酶切鉴定 | 第38页 |
| 4. 讨论 | 第38-40页 |
| 第四章 shRNA沉默猪Myostatin基因的研究 | 第40-48页 |
| 1. 材料与仪器 | 第40-41页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第40页 |
| ·主要实验仪器 | 第40-41页 |
| 2. 实验方法 | 第41-45页 |
| ·原代猪胎儿成纤维细胞的分离与培养 | 第41页 |
| ·细胞复苏、传代与冻存 | 第41-42页 |
| ·Myostatin表达载体pXF2F-MSTN的构建 | 第42页 |
| ·细胞转染 | 第42-43页 |
| ·细胞总RNA提取与反转录 | 第43-44页 |
| ·Realtime PCR检测瞬时转染shRNA表达载体后PEF细胞中有关基因的表达水平 | 第44-45页 |
| 3. 实验结果与分析 | 第45-47页 |
| ·shRNA表达载体的功能验证和筛选 | 第45-46页 |
| ·监测shRNA介导的干扰素反应(IFN activation) | 第46-47页 |
| 4. 讨论 | 第47-48页 |
| 第五章 表达shRNA的慢病毒载体构建及功能验证 | 第48-56页 |
| 1. 材料与仪器 | 第48-49页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第48页 |
| ·主要实验仪器 | 第48-49页 |
| 2. 实验方法 | 第49-52页 |
| ·表达shRNA的慢病毒载体构建 | 第49-50页 |
| ·重组慢病毒载体的酶切鉴定 | 第50页 |
| ·测序验证及结果分析 | 第50页 |
| ·慢病毒生产与浓缩 | 第50-51页 |
| ·慢病毒转导猪胎儿成纤维细胞 | 第51页 |
| ·Realtime PCR检测慢病毒载体转导后猪胎儿成纤维细胞中有关基因的表达变化 | 第51-52页 |
| ·数据处理 | 第52页 |
| 3. 实验结果 | 第52-54页 |
| ·慢病毒的shRNA表达质粒的构建结果 | 第52页 |
| ·慢病毒表达质粒的酶切鉴定结果 | 第52-53页 |
| ·慢病毒载体介导的RNAi的沉默效果 | 第53-54页 |
| 4. 讨论 | 第54-56页 |
| 第六章 shRNA慢病毒载体长期、稳定地抑制PEF中Myostatin表达的研究 | 第56-60页 |
| 1. 材料与仪器 | 第56页 |
| ·主要实验材料与试剂 | 第56页 |
| ·主要实验仪器 | 第56页 |
| 2. 实验方法 | 第56-57页 |
| ·慢病毒转导猪胎儿成纤维细胞及Blasticidin筛选稳定细胞系 | 第56-57页 |
| ·Realtime PCR检测慢病毒载体转导后猪胎儿成纤维细胞中有关基因的表达变化 | 第57页 |
| ·数据处理 | 第57页 |
| 3. 实验结果 | 第57-58页 |
| ·细胞筛选结果 | 第57-58页 |
| ·稳定细胞系中的RNAi效果研究 | 第58页 |
| 4. 讨论 | 第58-60页 |
| 全文结论 | 第60-62页 |
| 附录一 | 第62-64页 |
| 附录二 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-76页 |
| 致谢 | 第76页 |
