| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 缩为略词表 | 第10-11页 |
| 1.引言 | 第11-20页 |
| 1.1 铁皮石斛概述 | 第11-14页 |
| 1.1.1 铁皮石斛概述 | 第11页 |
| 1.1.2 铁皮石斛多糖药理作用 | 第11-12页 |
| 1.1.3 铁皮石斛含糖量 | 第12-13页 |
| 1.1.4 铁皮石斛多糖组分及结构分析 | 第13-14页 |
| 1.2 糖基转移酶概述 | 第14-17页 |
| 1.2.1 糖基转移酶概念及分类 | 第14-15页 |
| 1.2.2 UGT基因家族研究进展 | 第15-16页 |
| 1.2.3 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 | 第16-17页 |
| 1.3 全基因组研究技术 | 第17页 |
| 1.4 基因克隆技术 | 第17-19页 |
| 1.5 本研究的实际意义 | 第19-20页 |
| 2.材料、试剂及仪器 | 第20-21页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.2 试剂 | 第20页 |
| 2.3 仪器 | 第20-21页 |
| 3.方法 | 第21-31页 |
| 3.1 铁皮石斛全基因组糖基转移酶分析 | 第21-22页 |
| 3.1.1 铁皮石斛全基因组序列下载 | 第21页 |
| 3.1.2 基因预测 | 第21页 |
| 3.1.3 拟南芥和番茄糖代谢途径相关基因序列下载 | 第21-22页 |
| 3.1.4 数据处理 | 第22页 |
| 3.2 铁皮石斛基因组数据整合 | 第22页 |
| 3.3 β-1,3 葡聚糖合成酶基因序列的探寻 | 第22页 |
| 3.4 β-1,3 葡聚糖合成酶基因保守序列扩增验证 | 第22-27页 |
| 3.4.1 RNA提取 | 第22-23页 |
| 3.4.2 反转录 | 第23页 |
| 3.4.3 引物设计 | 第23-24页 |
| 3.4.4 PCR扩增体系 | 第24页 |
| 3.4.5 PCR扩增程序 | 第24-25页 |
| 3.4.6 PCR产物切胶回收 | 第25页 |
| 3.4.7 连接 | 第25-26页 |
| 3.4.8 转化 | 第26页 |
| 3.4.9 质粒提取 | 第26-27页 |
| 3.4.10 酶切验证 | 第27页 |
| 3.5 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3'RACE | 第27-29页 |
| 3.5.1 RNA提取 | 第27页 |
| 3.5.2 反转录 | 第27页 |
| 3.5.3 引物设计 | 第27-28页 |
| 3.5.4 PCR体系和程序 | 第28-29页 |
| 3.5.5 切胶回收、连接、转化、质粒提取及酶切验证 | 第29页 |
| 3.6 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 5’RACE | 第29-31页 |
| 3.6.1 RNA提取 | 第29页 |
| 3.6.2 反转录 | 第29页 |
| 3.6.3 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 5’RACE PCR扩增 | 第29-30页 |
| 3.6.4 切胶回收、连接、转化、质粒提取及酶切验证 | 第30-31页 |
| 4 结果 | 第31-48页 |
| 4.1 铁皮石斛全基因组糖基转移酶基因分析 | 第31-37页 |
| 4.1.1 拟南芥、番茄、水稻基因与铁皮石斛基因LocalBlast结果 | 第31页 |
| 4.1.2 糖基转移酶基因系统进化关系 | 第31-35页 |
| 4.1.3 铁皮石斛多糖合成途径预测 | 第35-37页 |
| 4.2 β-1,3 葡聚糖基因的保守序列探寻 | 第37-38页 |
| 4.2.1 铁皮石斛基因组序列本地Blast | 第37页 |
| 4.2.2 NCBI注释比对得到的scaffold | 第37-38页 |
| 4.3 β-1,3 葡聚糖基因保守区域扩增 | 第38-42页 |
| 4.3.1 RNA提取 | 第38-39页 |
| 4.3.2 叶片与茎的扩增 | 第39页 |
| 4.3.3 β-1,3 葡聚糖基因保守序列扩增 | 第39-40页 |
| 4.3.4 β-1,3 葡聚糖基因保守序列转化 | 第40页 |
| 4.3.5 β-1,3 葡聚糖基因保守序列菌落PCR验证 | 第40-41页 |
| 4.3.6 β-1,3 葡聚糖基因保守序列质粒提取 | 第41页 |
| 4.3.7 β-1,3 葡聚糖基因保守序列酶切 | 第41-42页 |
| 4.3.8 β-1,3 葡聚糖基因保守序列测序 | 第42页 |
| 4.4 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RACE | 第42-46页 |
| 4.4.1 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RACE PCR | 第42-43页 |
| 4.4.2 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RACE转化 | 第43页 |
| 4.4.3 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RAC菌落PCR验证 | 第43-44页 |
| 4.4.4 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RACE质粒提取 | 第44页 |
| 4.4.5 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RACE酶切 | 第44-45页 |
| 4.4.6 β-1,3 葡聚糖合成酶基因 3’RACE测序 | 第45-46页 |
| 4.5 β-1,3 葡聚糖基因的5’RACE | 第46-48页 |
| 5.讨论 | 第48-51页 |
| 5.1 铁皮石斛多糖合成途径 | 第48-49页 |
| 5.2 β-1,3 葡聚糖基因基因克隆 | 第49-51页 |
| 5.2.1 RNA提取 | 第49页 |
| 5.2.2 RACE技术 | 第49-50页 |
| 5.2.3 蓝白斑筛选 | 第50-51页 |
| 6.结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-60页 |
| 附录 1：试剂及溶液配制 | 第60-61页 |
| 附录 2：序列峰图 | 第61-63页 |
| 附录 3：拟南芥、番茄糖分别与铁皮石斛基因组LocalBlast结果 | 第63-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 作者简介 | 第74页 |
