| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-35页 |
| ·白藜芦醇研究概述 | 第15-23页 |
| ·白藜芦醇的结构和化学性质 | 第15-16页 |
| ·白藜芦醇的发现和分布 | 第16页 |
| ·虎杖中白藜芦醇的含量分布及影响因素 | 第16-17页 |
| ·白藜芦醇的药理作用 | 第17-18页 |
| ·白藜芦醇的生物合成途径 | 第18-19页 |
| ·白藜芦醇生物合成的相关酶 | 第19-20页 |
| ·白藜芦醇合酶和查尔酮合酶的基因结构和功能 | 第20-21页 |
| ·与白藜芦醇生物合成途径相关的生物合成途径 | 第21-23页 |
| ·利用细胞工程提高次生代谢产物产量 | 第23-26页 |
| ·次生代谢产物产量的影响因素 | 第23-24页 |
| ·利用细胞工程提高白藜芦醇产量的研究 | 第24-25页 |
| ·白藜芦醇的产业化 | 第25-26页 |
| ·利用基因工程提高植物次生代谢物产量 | 第26-31页 |
| ·利用基因工程提高植物次生代谢物产量的策略 | 第26-28页 |
| ·关键酶基因的导入 | 第28-29页 |
| ·限制非目的途径的酶活性 | 第29-31页 |
| ·调控因子的应用 | 第31页 |
| ·利用微生物工程提高次生代谢物产量 | 第31-32页 |
| ·本课题的研究目的意义、内容、技术路线 | 第32-35页 |
| ·研究目的意义 | 第32-33页 |
| ·研究内容 | 第33-34页 |
| ·技术路线 | 第34-35页 |
| 第二章 PcRS 基因的组织表达与白藜芦醇含量分布 | 第35-46页 |
| ·实验材料 | 第35-37页 |
| ·植物材料 | 第35页 |
| ·主要试剂 | 第35-36页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第36页 |
| ·溶液配制 | 第36页 |
| ·仪器 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·HPLC 测定虎杖不同组织中白藜芦醇苷及其苷元的含量 | 第37-39页 |
| ·Northern blot 分析 PcRS 基因的组织表达特性 | 第39-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-44页 |
| ·虎杖中各组织部位的白藜芦醇苷及其苷元的含量测定 | 第42-43页 |
| ·虎杖 PcRS 基因表达的组织特异性 | 第43页 |
| ·PcRS 组织表达与白藜芦醇苷及其苷元含量分布的相关性分析 | 第43-44页 |
| ·讨论 | 第44-45页 |
| ·本章小结 | 第45-46页 |
| 第三章 PcRS 基因转化拟南芥的研究 | 第46-71页 |
| ·材料 | 第46-47页 |
| ·植物材料 | 第46页 |
| ·载体和菌株 | 第46-47页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第47页 |
| ·溶液配制 | 第47页 |
| ·方法 | 第47-54页 |
| ·载体构建 | 第47-49页 |
| ·农杆菌的转化及鉴定 | 第49页 |
| ·农杆菌介导的花序浸泡法转化拟南芥 | 第49-50页 |
| ·转基因植株的筛选与鉴定 | 第50页 |
| ·外源基因的整合与表达 | 第50-52页 |
| ·HPLC 和 HPLC-ESI-MS | 第52页 |
| ·抗真菌活性测定 | 第52-53页 |
| ·花青素测定 | 第53-54页 |
| ·结果与分析 | 第54-67页 |
| ·PcRS 基因的植物过量表达载体构建 | 第54-55页 |
| ·转基因植株的潮霉素筛选与 PCR 鉴定 | 第55-56页 |
| ·外源基因整合与表达 | 第56-58页 |
| ·T3 代转基因拟南芥植株的化学成分分析 | 第58-62页 |
| ·转 PcRS 基因拟南芥纯系表型鉴定 | 第62-64页 |
| ·转基因植株甲醇提取物抗真菌活性鉴定 | 第64-65页 |
| ·转 PcRS 基因拟南芥离体叶片抗真菌活性鉴定 | 第65-67页 |
| ·讨论 | 第67-69页 |
| ·本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 PcRS 基因转化虎杖的研究 | 第71-89页 |
| ·材料 | 第72页 |
| ·载体和菌株 | 第72页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第72页 |
| ·溶液配制 | 第72页 |
| ·方法 | 第72-76页 |
| ·过量表达载体构建 | 第72页 |
| ·虎杖无菌苗的获得与茎尖外植体制备 | 第72-73页 |
| ·虎杖茎尖潮霉素敏感性试验 | 第73页 |
| ·虎杖茎尖遗传转化体系建立的影响因素 | 第73-74页 |
| ·转基因植株的分子鉴定 | 第74页 |
| ·HPLC 分析白藜芦醇苷及其苷元的含量 | 第74页 |
| ·虎杖总黄酮含量测定 | 第74-75页 |
| ·虎杖中槲皮素含量测定 | 第75页 |
| ·转基因虎杖无性繁殖后代鉴定 | 第75-76页 |
| ·结果与分析 | 第76-85页 |
| ·虎杖茎尖对潮霉素的敏感性 | 第76页 |
| ·虎杖茎尖遗传转化体系的建立 | 第76-80页 |
| ·过量表达 PcRS 的转基因虎杖的分子鉴定 | 第80-81页 |
| ·白藜芦醇苷及其苷元的含量测定 | 第81-82页 |
| ·虎杖根茎中总黄酮含量 | 第82-83页 |
| ·虎杖中槲皮素含量 | 第83-84页 |
| ·转基因植株无性繁殖后代的检测 | 第84-85页 |
| ·讨论 | 第85-88页 |
| ·本章小结 | 第88-89页 |
| 第五章 PcPKS1 基因的 RNA 干涉调控白藜芦醇生物合成 | 第89-105页 |
| ·材料 | 第89-90页 |
| ·植物材料 | 第89-90页 |
| ·载体和菌株 | 第90页 |
| ·PCR 扩增引物 | 第90页 |
| ·溶液配制 | 第90页 |
| ·方法 | 第90-92页 |
| ·RNAi 载体的构建 | 第90-91页 |
| ·虎杖茎尖遗传转化 | 第91页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第91页 |
| ·白藜芦醇苷及其苷元含量测定 | 第91页 |
| ·虎杖中总黄酮含量的测定 | 第91页 |
| ·虎杖中槲皮素含量的测定 | 第91页 |
| ·虎杖中花青素含量的测定 | 第91页 |
| ·转基因虎杖无性繁殖后代鉴定 | 第91-92页 |
| ·结果与分析 | 第92-101页 |
| ·RNAi 载体的鉴定 | 第92-93页 |
| ·RNAi 虎杖植株的分子鉴定 | 第93-94页 |
| ·白藜芦醇苷及其苷元的含量测定 | 第94-96页 |
| ·虎杖总黄酮含量 | 第96页 |
| ·虎杖槲皮素含量 | 第96-98页 |
| ·RNAi 虎杖植株的表型变化及花青素含量测定 | 第98-99页 |
| ·RNAi 虎杖植株无性繁殖后代的检测 | 第99-101页 |
| ·讨论 | 第101-103页 |
| ·本章小结 | 第103-105页 |
| 结论与展望 | 第105-107页 |
| 结论 | 第105-106页 |
| 本论文的创新点 | 第106页 |
| 展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-121页 |
| 附录 缩写词(Abbreviation) | 第121-123页 |
| 攻读博士学位期间取得的研究成果 | 第123-124页 |
| 致谢 | 第124-125页 |
| 附件 | 第125页 |
