中文摘要 | 第1-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
目录 | 第6-9页 |
第一章 前言 | 第9-21页 |
1. TrxG基因家族简介 | 第9-10页 |
2. Brpf1、Brpf2基因简介 | 第10-16页 |
·Brpf1基因的简介 | 第10-11页 |
·Brpf2基因简介 | 第11页 |
·Brpf1、Brpf2的功能结构域简介 | 第11-16页 |
3. 同源异型框基因简介 | 第16-17页 |
4. Rhox5基因简介 | 第17-19页 |
·Rhox基因家族简介 | 第17页 |
·Rhox5基因简介 | 第17-19页 |
5. 研究目的、意义及创新点 | 第19-21页 |
·研究目的 | 第19页 |
·研究意义及创新点 | 第19-21页 |
第二章 实验仪器与材料 | 第21-26页 |
1. 主要仪器 | 第21页 |
2. 实验材料 | 第21-26页 |
·细胞、菌种、质粒 | 第21-22页 |
·主要试剂 | 第22-23页 |
·主要溶液的配置 | 第23-26页 |
第三章 实验方法 | 第26-40页 |
1. Western blot检测Brpf1与Brpf2蛋白在小鼠体内蛋白表达水平的分布 | 第26-29页 |
·小鼠组织的提取 | 第26-27页 |
·SDS-PAGE | 第27-28页 |
·转膜 | 第28页 |
·封闭及抗原抗体反应 | 第28页 |
·发光显影 | 第28-29页 |
2. 生物信息学分析Brpf1蛋白和Brpf2蛋白的结构及对其功能 | 第29页 |
3. Brfp1、Brpf2蛋白与Rhox5蛋白结合的差异性研究 | 第29-35页 |
·pEYFP-Brpf1、pEYFP-Brpf2和pDsReD2-Rhox5重组质粒的构建 | 第29-34页 |
·荧光定位实验验证Brpf1蛋白、Brfp2蛋白和Rhox5蛋白的相互作用 | 第34-35页 |
4. Brpf2蛋白与Rhox5蛋白相互作用关键结构域的确定 | 第35-36页 |
·PEYFP-BrP几A、PEYFP-BrP几B、PEYFP-BrP几C、PEYFP-BrP几D、PEYFP-BrP几E 重组质粒的构建 | 第35-36页 |
·荧光定位实验验证Brfp2蛋白与Rhox5蛋白相互作用的关键结构域 | 第36页 |
5. Brpf1、Brpf2蛋白稳定表达细胞系的构建 | 第36-38页 |
·Brpf1-pcDNA(3.1+)和Brpf2-pcDNA(3.1+)重组质粒的构建 | 第36-37页 |
·NIH3T3细胞对G418耐受性的筛选 | 第37页 |
·G418筛选稳定表达细胞系 | 第37-38页 |
·Western blot鉴定Brpf1、Brpf2蛋白稳定表达细胞系 | 第38页 |
·pGEX4T1-Brpf1、pGEX4T1-Brpf2重组质粒的构建 | 第38页 |
·pGEX4T1-Brpf1、pGEX4T1-Brpf2和pGEX4T1质粒转化至RossetaTM 2(DE3)表达菌株 | 第38页 |
6. Brpf1、Brpf2蛋白的融合表达及纯化 | 第38-40页 |
第四章 结果与讨论 | 第40-58页 |
1. Brpf1和Brpf2在小鼠体内蛋白表达水平的分布结果 | 第40页 |
2. 生物信息学分析结果 | 第40-51页 |
·Brpf1和Brpf2蛋白二级结构分析结果 | 第40-45页 |
·Brpf1和Brpf2蛋白溶剂可及性分析结果 | 第45-46页 |
·Brpf1和Brpf2蛋白三级结构分析结果 | 第46-47页 |
·Brpf1和Brpf2蛋白功能位点分析结果 | 第47-50页 |
·Brpf1和Brpf2蛋白跨膜区域分析结果 | 第50-51页 |
3. Brfp1、Brpf2蛋白与Rhox5蛋白结合的差异性研究 | 第51-53页 |
·pEYFP-Brpf1、pEYFP-Brpf2和pDsReD2-Rhox5重组质粒的PCR鉴定结果 | 第51页 |
·Brpf1蛋白、Brfp2蛋白和Rhox5蛋白的相互作用结果 | 第51-53页 |
4. Brpf2蛋白与Rhox5蛋白相互作用关键结构域的确定 | 第53-55页 |
·pEYFP-Brpf2A、pEYFP-Brpf2B、pEYFP-Brpf2C、pEYFP-Brprf2D、pEYFP-Brpf2E重组质粒PCR鉴定结果 | 第53页 |
·Brfp2蛋白和Rhox5蛋白相互作用关键结构域的筛选结果 | 第53-55页 |
5. Brpf1、Brpf2蛋白稳定表达细胞系的构建 | 第55-56页 |
·Brpf1-pcDNA(3.1+)和Brpf2-pcDNA(3.1+)重组质粒的双酶切鉴定结果 | 第55页 |
·Brpf1、Brpf2蛋白稳定表达细胞系的鉴定结果 | 第55-56页 |
6. Brpf1、Brpf2蛋白的融合表达及纯化 | 第56-58页 |
·pGEX4T1-Brpf1、pGEX4T1-Brpf2重组质粒的PCR鉴定结果 | 第56页 |
·Brpf1、Brpf2原核表达融合蛋白的纯化结果 | 第56-58页 |
第五章 全文小结与展望 | 第58-60页 |
参考文献 | 第60-66页 |
附录 | 第66-74页 |
在学期间发表论文清单 | 第74-75页 |
致谢 | 第75页 |