| 摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-18页 |
| 1.1 丝氨酸蛋白酶抑制剂概况 | 第12页 |
| 1.2 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂概况 | 第12-14页 |
| 1.2.1 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构特征 | 第13页 |
| 1.2.2 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的作用机制 | 第13页 |
| 1.2.3 Kazal型丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能 | 第13-14页 |
| 1.3 丝氨酸蛋白酶抑制剂在寄生虫中的研究进展 | 第14-16页 |
| 1.3.1 寄生性蠕虫丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第14-16页 |
| 1.3.2 寄生性原虫丝氨酸蛋白酶抑制剂 | 第16页 |
| 1.4 研究目的和意义 | 第16-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-30页 |
| 2.1 材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 虫种和实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第18页 |
| 2.1.4 主要仪器和设备 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要软件及网络资源 | 第19-20页 |
| 2.2 试验方法 | 第20-30页 |
| 2.2.1 TsKaSPI基因克隆 | 第20-24页 |
| 2.2.2 TsKaSPI重组表达质粒p ET-TsKaSPI的构建 | 第24-25页 |
| 2.2.3 TsKaSPI重组蛋白的诱导表达及表达条件优化 | 第25-26页 |
| 2.2.4 TsKaSPI重组蛋白的纯化及Western Blot印迹 | 第26页 |
| 2.2.5 发色底物法检测重组蛋白酶活性 | 第26-27页 |
| 2.2.6 重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究 | 第27-28页 |
| 2.2.7 旋毛虫KaSPI蛋白的抗原性检测 | 第28-30页 |
| 3 结果 | 第30-41页 |
| 3.1 基因克隆结果 | 第30-33页 |
| 3.1.1 旋毛形线虫肌幼虫目的基因片段RT-PCR扩增结果 | 第30页 |
| 3.1.2 重组克隆质粒DNA的鉴定 | 第30-32页 |
| 3.1.3 信号肽预测结果 | 第32-33页 |
| 3.1.4 NLS和NES预测结果 | 第33页 |
| 3.2 诱导表达结果 | 第33-36页 |
| 3.2.1 TsKaSPI重组表达质粒构建结果 | 第33-34页 |
| 3.2.2 TsKaSPI重组蛋白表达时相及可溶性分析 | 第34-35页 |
| 3.2.3 TsKaSPI重组蛋白的表达IPTG浓度的优化 | 第35页 |
| 3.2.4 TsKaSPI重组蛋白的表达温度的优化 | 第35-36页 |
| 3.2.5 TsKaSPI重组蛋白的纯化结果 | 第36页 |
| 3.3 TsKaSPI重组蛋白的免疫印迹分析 | 第36-37页 |
| 3.4 发色底物法检测重组蛋白酶活性 | 第37-38页 |
| 3.5 旋毛虫KaSPI蛋白的抗原性检测 | 第38-41页 |
| 3.5.1 TsKaSPI重组蛋白对小鼠的免疫保护性研究结果 | 第38-39页 |
| 3.5.2 多克隆抗体Western Blot分析 | 第39页 |
| 3.5.3 免疫组织化学染色分析 | 第39-41页 |
| 4 讨论 | 第41-44页 |
| 4.1 TsKaSPI的克隆 | 第41页 |
| 4.2 TsKaSPI原核表达体系的构建 | 第41页 |
| 4.3 TsKaSPI活性检测 | 第41-42页 |
| 4.4 TsKaSPI免疫相关性 | 第42-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-52页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第52页 |
