| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第14-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-21页 |
| 1.1 坏死梭杆菌概述 | 第15-18页 |
| 1.1.1 坏死梭杆菌病原特征 | 第15-16页 |
| 1.1.2 坏死梭杆菌的致病机理 | 第16页 |
| 1.1.3 坏死梭杆菌的检测 | 第16-18页 |
| 1.2 未知基因的克隆 | 第18-20页 |
| 1.2.1 探针法 | 第18页 |
| 1.2.2 接头法 | 第18页 |
| 1.2.3 差减杂交 | 第18页 |
| 1.2.4 图位克隆 | 第18-19页 |
| 1.2.5 同源克隆 | 第19页 |
| 1.2.6 反向PCR | 第19-20页 |
| 1.2.7 cDNA末端快速扩增 | 第20页 |
| 1.3 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 致病性坏死梭杆菌血凝素相关外膜蛋白基因的克隆与生物信息学分析 | 第21-33页 |
| 2.1 材料与方法 | 第21-25页 |
| 2.1.1 菌种、载体和试剂 | 第21页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第21-22页 |
| 2.1.3 引物设计与合成 | 第22页 |
| 2.1.4 FN(AB)基因组DNA的提取 | 第22页 |
| 2.1.5 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 5’端旁侧序列的克隆与测序 | 第22-24页 |
| 2.1.6 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 3’端旁侧序列的克隆与测序 | 第24页 |
| 2.1.7 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 5’端旁侧序列的验证 | 第24页 |
| 2.1.8 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 3’端旁侧序列的验证 | 第24页 |
| 2.1.9 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因的序列分析 | 第24页 |
| 2.1.10 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白的生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.2 结果与分析 | 第25-31页 |
| 2.2.1 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 5’端旁侧序列的克隆与测序 | 第25-26页 |
| 2.2.2 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 3’端旁侧序列的克隆与测序 | 第26页 |
| 2.2.3 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 5’端旁侧序列的验证 | 第26-27页 |
| 2.2.4 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因 3’端旁侧序列的验证 | 第27页 |
| 2.2.5 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白基因的序列分析 | 第27-28页 |
| 2.2.6 FN(AB)120 ku血凝素相关外膜蛋白的生物信息学分析 | 第28-31页 |
| 2.3 讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 致病性坏死梭杆菌 120 ku血凝素相关外膜蛋白基因的分段克隆及表达载体的构建 | 第33-43页 |
| 3.1 材料与方法 | 第33-37页 |
| 3.1.1 菌种与载体 | 第33页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第33页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第33-34页 |
| 3.1.4 引物设计与合成 | 第34页 |
| 3.1.5 基因片段p1、p2、p3的PCR扩增 | 第34-35页 |
| 3.1.6 基因片段p1、p2、p3 PCR产物的回收 | 第35页 |
| 3.1.7 重组克隆质粒的构建 | 第35页 |
| 3.1.8 重组克隆质粒转化E.coli Trans T1 | 第35页 |
| 3.1.9 重组克隆质粒的提取 | 第35页 |
| 3.1.10重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第35页 |
| 3.1.11重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| 3.1.12重组克隆质粒的测序鉴定 | 第36页 |
| 3.1.13重组表达质粒的构建 | 第36页 |
| 3.1.14重组表达质粒转化E.coli Trans T1 | 第36页 |
| 3.1.15重组表达质粒的提取 | 第36-37页 |
| 3.1.16重组表达质粒的PCR鉴定 | 第37页 |
| 3.1.17重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第37页 |
| 3.1.18重组表达质粒的测序鉴定 | 第37页 |
| 3.1.19重组表达质粒转化BL21（DE3）plysS | 第37页 |
| 3.1.20重组表达质粒的提取与鉴定 | 第37页 |
| 3.2 结果与分析 | 第37-41页 |
| 3.2.1 基因片段p1、p2、p3的扩增 | 第37-38页 |
| 3.2.2 重组克隆质粒的PCR鉴定 | 第38-39页 |
| 3.2.3 重组克隆质粒的双酶切鉴定 | 第39页 |
| 3.2.4 重组克隆质粒的测序鉴定 | 第39-40页 |
| 3.2.5 重组表达质粒的PCR鉴定 | 第40页 |
| 3.2.6 重组表达质粒的双酶切鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.7 重组表达质粒的测序鉴定 | 第41页 |
| 3.3 讨论 | 第41-43页 |
| 第四章 致病性坏死梭杆菌 120 ku血凝素相关外膜蛋白的原核表达及纯化 | 第43-54页 |
| 4.1 材料与方法 | 第43-45页 |
| 4.1.1 主要试剂 | 第43页 |
| 4.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 4.1.3 重组原核表达质粒在大肠杆菌中最适表达条件的筛选 | 第43页 |
| 4.1.4 SDS-PAGE分析 | 第43-44页 |
| 4.1.5 P1、P2、P3的大量表达 | 第44页 |
| 4.1.6 P1、P2、P3的分离纯化 | 第44-45页 |
| 4.1.7 Western blot分析 | 第45页 |
| 4.2 结果与分析 | 第45-52页 |
| 4.2.1 重组原核表达质粒在大肠杆菌中最适表达条件的摸索 | 第45-51页 |
| 4.2.2 纯化产物P1、P2、P3的SDS-PAGE分析 | 第51-52页 |
| 4.2.3 Western blot分析 | 第52页 |
| 4.3 讨论 | 第52-54页 |
| 第五章 致病性坏死梭杆菌重组 120 ku血凝素相关外膜蛋白的兔体免疫试验 | 第54-56页 |
| 5.1 材料与方法 | 第54-55页 |
| 5.1.1 主要试剂及实验动物 | 第54页 |
| 5.1.2 主要仪器 | 第54页 |
| 5.1.3 抗原的制备 | 第54页 |
| 5.1.4 动物分组及免疫程序 | 第54页 |
| 5.1.5 兔血清的抗体检测 | 第54-55页 |
| 5.2 结果与分析 | 第55页 |
| 5.2.1 兔血清的抗体检测 | 第55页 |
| 5.3 讨论 | 第55-56页 |
| 第六章 全文结论 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 附录 | 第64-77页 |
| 作者简历 | 第77页 |
