| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 第1章 引言 | 第10-47页 |
| 1.1. 斑马鱼的胚胎发育过程 | 第10-16页 |
| 1.1.1. 斑马鱼作为模式生物的优势 | 第11-12页 |
| 1.1.2. 斑马鱼胚胎的发育过程 | 第12-16页 |
| 1.2. 胚胎发育过程中的图式形成 | 第16-27页 |
| 1.2.1. 胚胎三个胚层的形成与发育命运 | 第17页 |
| 1.2.2. 胚胎中内胚层的诱导 | 第17-24页 |
| 1.2.3. 胚胎背腹轴线的建立 | 第24-27页 |
| 1.3. Nodal信号通路 | 第27-33页 |
| 1.3.1. Nodal通路的信号转导 | 第28-31页 |
| 1.3.2. 调控Nodal信号通路的相关因子 | 第31-32页 |
| 1.3.3. Nodal信号在胚胎发育中的重要作用 | 第32-33页 |
| 1.4. 成纤维细胞生长因子（FGF）信号通路 | 第33-40页 |
| 1.4.1. FGF家族成员 | 第33-34页 |
| 1.4.2. FGF通路的信号转导 | 第34-37页 |
| 1.4.3. 调控FGF信号通路的相关因子 | 第37-38页 |
| 1.4.4. FGF信号在胚胎发育中的重要作用 | 第38-40页 |
| 1.5. Raf家族蛋白及其调控 | 第40-46页 |
| 1.5.1. Raf蛋白结构及其调控机制 | 第40-44页 |
| 1.5.2. Araf蛋白及其研究进展 | 第44-46页 |
| 1.6. 本课题的研究目的与意义 | 第46-47页 |
| 第2章 材料与方法 | 第47-74页 |
| 2.1. 斑马鱼胚胎的获得与培养条件 | 第47页 |
| 2.2. 实验相关克隆的构建 | 第47-51页 |
| 2.2.1. 研究使用的质粒信息 | 第47-48页 |
| 2.2.2. 构建克隆的引物信息 | 第48-49页 |
| 2.2.3. 质粒的提取与纯化 | 第49-51页 |
| 2.3. 胚胎显微注射 | 第51-54页 |
| 2.3.1. 体外转录合成m RNA | 第51-52页 |
| 2.3.2. 吗啉环修饰的反义寡核苷酸（MO）的设计与使用 | 第52-53页 |
| 2.3.3. 胚胎显微注射方法 | 第53-54页 |
| 2.4. 胚胎整胚原位杂交 | 第54-58页 |
| 2.4.1. 探针的制备 | 第54-55页 |
| 2.4.2. 原位杂交所需材料与试剂 | 第55-57页 |
| 2.4.3. 原位杂交方法 | 第57-58页 |
| 2.5. 斑马鱼胚胎总RNA提取和半定量PCR | 第58-60页 |
| 2.5.1. 总RNA提取 | 第58-59页 |
| 2.5.2. c DNA的制备 | 第59-60页 |
| 2.5.3. 半定量PCR | 第60页 |
| 2.6. 实时荧光定量PCR | 第60-61页 |
| 2.7. 胚胎整胚免疫荧光 | 第61-63页 |
| 2.7.1. 整胚免疫荧光所用主要试剂 | 第61-62页 |
| 2.7.2. 整胚免疫荧光方法 | 第62-63页 |
| 2.8. 胚胎免疫印迹 | 第63-64页 |
| 2.9. 细胞培养 | 第64-68页 |
| 2.9.1. 细胞系的种类与相关试剂 | 第64-65页 |
| 2.9.2. 细胞的培养、传代、冻存与复苏方法 | 第65-66页 |
| 2.9.3. 细胞转染 | 第66-68页 |
| 2.10. 细胞的双荧光素酶报告基因实验 | 第68-69页 |
| 2.10.1. 细胞选择与实验试剂 | 第68页 |
| 2.10.2. ARE报告基因实验方法 | 第68-69页 |
| 2.10.3. Elk-1 报告基因实验方法 | 第69页 |
| 2.10.4. 实验数据的分析 | 第69页 |
| 2.11. 细胞蛋白检测的免疫印迹 | 第69-72页 |
| 2.11.1. 实验试剂与材料 | 第70页 |
| 2.11.2. 免疫印迹实验方法 | 第70-72页 |
| 2.12. 免疫共沉淀 | 第72-74页 |
| 2.12.1. 免疫共沉淀相关试剂与材料 | 第72页 |
| 2.12.2. 免疫共沉淀实验方法 | 第72-74页 |
| 第3章 全长Araf拮抗Nodal/Smad2信号介导的中内胚层诱导 | 第74-88页 |
| 3.1. 全长Araf激酶抑制中内胚层诱导和背部组织的形成 | 第74-79页 |
| 3.1.1. araf基因全长转录本的表达谱 | 第74-75页 |
| 3.1.2. 敲低araf促进斑马鱼胚胎中内胚层的诱导 | 第75-78页 |
| 3.1.3. 过表达全长araf m RNA抑制中内胚层的诱导 | 第78-79页 |
| 3.1.4. 小结 | 第79页 |
| 3.2. 全长Araf拮抗Nodal/Smad2信号以抑制中内胚层诱导 | 第79-84页 |
| 3.2.1. 全长Araf拮抗胚胎中Nodal信号过表达引起的发育异常 | 第80-81页 |
| 3.2.2. 敲低araf部分挽救抑制Nodal导致的发育缺陷 | 第81-83页 |
| 3.2.3. 全长Araf对Nodal信号的拮抗作用不依赖于下游的Erk | 第83-84页 |
| 3.2.4. 小结 | 第84页 |
| 3.3. 本章总结及讨论 | 第84-88页 |
| 第4章 Araftv2拮抗FGF/MAPK信号调控胚胎的胚层分化 | 第88-123页 |
| 4.1. Araftv2调控斑马鱼胚胎早期的胚层分化 | 第88-92页 |
| 4.1.1. araf tv2在斑马鱼胚胎中的时空表达谱 | 第89-91页 |
| 4.1.2. 过表达araf tv2导致胚胎出现发育异常 | 第91-92页 |
| 4.1.3. 小结 | 第92页 |
| 4.2. Araftv2不拮抗全长Araf对TGF-β/Smad2信号的抑制作用 | 第92-99页 |
| 4.2.1. Araftv2能与Araf tv1蛋白结合 | 第93-94页 |
| 4.2.2. Araftv2不拮抗全长Araf对TGF-β/Smad2信号的抑制作用 | 第94-98页 |
| 4.2.3. 小结 | 第98-99页 |
| 4.3. Araftv2在细胞系中和胚胎中拮抗FGF/MAPK通路 | 第99-106页 |
| 4.3.1. Araftv2抑制FGF/MAPK信号活性 | 第99-101页 |
| 4.3.2. Araftv2拮抗胚胎中激活的FGF/MAPK信号 | 第101-103页 |
| 4.3.3. Araftv2拮抗胚胎中过表达FGF所导致的标记基因改变 | 第103-106页 |
| 4.3.4. 小结 | 第106页 |
| 4.4. Araftv2通过作用于Ras抑制FGF/MAPK信号活性 | 第106-118页 |
| 4.4.1. Araftv2与Ras直接相互作用 | 第106-108页 |
| 4.4.2. Araftv2拮抗Ras介导的FGF/MAPK信号活性 | 第108-114页 |
| 4.4.3. Araftv2特异地作用于Ras水平来抑制FGF/MAPK信号 | 第114-116页 |
| 4.4.4. 小结 | 第116-118页 |
| 4.5. Araftv2抑制FGF/MAPK信号依赖于其与Ras的互作 | 第118-122页 |
| 4.6. 本章总结及讨论 | 第122-123页 |
| 第5章 讨论与展望 | 第123-130页 |
| 5.1. 本课题的结论与模型 | 第123-124页 |
| 5.2. Raf蛋白对于中内胚层发育的调控作用 | 第124-125页 |
| 5.3. araf基因表达的调控 | 第125-127页 |
| 5.4. Araftv2对TGF-β/Smad2信号的抑制作用 | 第127页 |
| 5.5. Araftv2对Ras蛋白的特异作用 | 第127-129页 |
| 5.6. 斑马鱼Raf蛋白对FGF信号的转导 | 第129-130页 |
| 参考文献 | 第130-144页 |
| 致谢 | 第144-146页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第146页 |
