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枇杷赤霉素代谢途径关键酶基因的克隆及表达初步分析

摘要第7-9页
ABSTRACT第9-11页
第1章 文献综述第12-40页
    1.1 枇杷果实品质育种概述第12页
    1.2 植物单性结实研究概况第12-19页
        1.2.1 植物单性结实的类型第13-14页
        1.2.2 有关植物单性结实激素含量测定研究第14-18页
        1.2.3 单性结实相关基因研究第18-19页
    1.3.植物激素的检测第19-23页
        1.3.1 植物激素的生物学功能及相互作用第19-21页
        1.3.2 植物激素的提取与含量测定方法第21-23页
    1.4 高等植物中的赤霉素代谢途径第23-36页
        1.4.1 赤霉素的合成第23-25页
        1.4.2 赤霉素的钝化第25-26页
        1.4.3 赤霉素代谢途径关键酶基因第26-33页
        1.4.4 赤霉素代谢途径的调控第33-35页
        1.4.5 赤霉素信号转导第35-36页
    1.5 实时荧光定量PCR技术理论及在植物研究领域的应用第36-40页
        1.5.1 荧光定量PCR技术的理论依据第36-37页
        1.5.2 荧光定量PCR技术中的重要参数第37页
        1.5.3 实时荧光定量PCR的类型第37-38页
        1.5.4 实时荧光定量PCR技术在植物领域的应用第38-40页
第2章 引言第40-42页
    2.1 研究的目的和意义第40页
    2.2 研究内容第40页
        2.2.1 枇杷果实发育过程中植物激素含量的测定第40页
        2.2.2 赤霉素代谢途径关键氧化酶家族基因片段的克隆第40页
        2.2.3 赤霉素代谢途径关键氧化酶家族基因的表达特性分析第40页
    2.3 研究技术路线第40-42页
第3章 枇杷果实发育过程中多种植物激素的提取及检测第42-58页
    3.1 材料与试剂第42页
        3.1.1 试验材料第42页
        3.1.2 主要试剂第42页
    3.2 主要仪器与设备第42页
    3.3 试验方法第42-43页
        3.3.1 植物激素的提取与纯化第42-43页
        3.3.2 色谱条件第43页
        3.3.3 标准品制配第43页
        3.3.4 定性和定量测定第43页
    3.4 结果与分析第43-54页
        3.4.1 流动相条件的选择第43-46页
        3.4.2 检测方法的线性范围与检出限第46页
        3.4.3 检测方法的精密度第46页
        3.4.4 样品回收率测定第46-47页
        3.4.5 枇杷果实发育过程中激素含量的测定第47-54页
    3.5 讨论第54-58页
        3.5.1 木本植物提取剂的选择和C18固相萃取小柱的应用第55页
        3.5.2 植物激素测定的波长选择第55-56页
        3.5.3 枇杷果实发育过程中多种植物激素的测定第56-58页
第4章 枇杷赤霉素代谢途径关键酶基因的克隆第58-80页
    4.1 材料与试剂第58页
        4.1.1 试验材料第58页
        4.1.2 主要试剂第58页
    4.2 主要仪器设备第58页
    4.3 试验方法第58-63页
        4.3.1 RNA的制备第58-59页
        4.3.2 cDNA的合成第59-60页
        4.3.3 引物设计及反应体系和扩增程序第60-61页
        4.3.4 目的片段回收第61页
        4.3.5 目的片段与载体的连接第61页
        4.3.6 重组质粒转化入大肠杆菌第61-62页
        4.3.7 阳性克隆的鉴定第62页
        4.3.8 序列分析工具第62-63页
    4.4 结果与分析第63-77页
        4.4.1 RNA提取质量检测第63页
        4.4.2 赤霉素关键酶基因克隆片段与序列分析第63-64页
        4.4.3 赤霉素关键酶基因cDNA序列的电子克隆及序列分析第64-72页
        4.4.4 赤霉素关键酶基因蛋白理化性质分析第72-73页
        4.4.5 蛋白结构域及蛋白motif搜索第73-74页
        4.4.6 蛋白结构预测第74-75页
        4.4.7 蛋白进化关系分析第75-77页
    4.5 讨论第77-80页
第5章 枇杷赤霉素代谢途径关键酶基因及DELLA基因的表达特性分析第80-88页
    5.1 材料与试剂第80页
        5.1.1 试验材料第80页
        5.1.2 主要试剂第80页
    5.2 主要仪器设备第80页
    5.3 试验方法第80-82页
        5.3.1 总RNA提取和检测第80页
        5.3.2 cDNA的合成第80-81页
        5.3.3 荧光定量引物设计第81-82页
        5.3.4 荧光定量反应体系和程序第82页
    5.4 结果与分析第82-86页
        5.4.1 RNA提取结果检测第82-83页
        5.4.2 荧光定量PCR引物特异性及内参基因的检测第83-84页
        5.4.3 赤霉素代谢途径关键酶基因及DELLA基因的表达分析第84-86页
    5.5 讨论第86-88页
        5.5.1 赤霉素诱导的赤霉素代谢基因的表达第86-87页
        5.5.2 赤霉素诱导的赤霉素信号响应及调控第87-88页
第6章 结论、创新点与展望第88-90页
参考文献第90-104页
附录 缩略词表第104-105页
在学期间所发表文章及参研项目第105-106页
致谢第106页

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