| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 1.文献综述 | 第17-43页 |
| 1.1 支持细胞间紧密连接的特征和功能 | 第17-32页 |
| 1.1.1 紧密连接相关蛋白简述 | 第18-22页 |
| 1.1.2 支持细胞间紧密连接的作用 | 第22-24页 |
| 1.1.3 支持细胞间紧密连接的调节 | 第24-32页 |
| 1.2 热应激与紧密连接 | 第32-38页 |
| 1.2.1 热应激概述 | 第32-33页 |
| 1.2.2 热应激对紧密连接的影响 | 第33-34页 |
| 1.2.3 热应激影响紧密连接的可能机制 | 第34-38页 |
| 1.3 AMPK信号通路与紧密连接 | 第38-42页 |
| 1.3.1 AMPK信号通路概述 | 第38-40页 |
| 1.3.2 AMPK与热应激 | 第40-41页 |
| 1.3.3 AMPK与紧密连接 | 第41-42页 |
| 1.4 结束语 | 第42-43页 |
| 2.引言 | 第43-47页 |
| 2.1 研究的目的及意义 | 第43-45页 |
| 2.2 主要技术路线 | 第45-47页 |
| 3.SC体外HS模型的建立及HS对紧密连接蛋白表达的影响 | 第47-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第48-51页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第48页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第48-49页 |
| 3.1.3 主要试剂配制 | 第49-50页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第50-51页 |
| 3.2 实验方法 | 第51-57页 |
| 3.2.1 支持细胞的体外分离培养 | 第51-52页 |
| 3.2.2 体外培养支持细胞的纯度鉴定 | 第52页 |
| 3.2.3 热应激处理 | 第52-53页 |
| 3.2.4 支持细胞活力检测 | 第53页 |
| 3.2.5 支持细胞内线粒体膜电位检测 | 第53页 |
| 3.2.6 细胞总蛋白提取 | 第53-54页 |
| 3.2.7 蛋白浓度测定 | 第54页 |
| 3.2.8 Western blotting | 第54-55页 |
| 3.2.9 细胞总RNA提取 | 第55页 |
| 3.2.10 总RNA纯度检测及完整性检测 | 第55-56页 |
| 3.2.11 反转录 | 第56-57页 |
| 3.2.12 荧光定量RT-PCR | 第57页 |
| 3.2.13 统计分析 | 第57页 |
| 3.3 实验结果 | 第57-62页 |
| 3.3.1 支持细胞的分离、培养及纯度鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3.2 HS对支持细胞活力的影响 | 第58-59页 |
| 3.3.3 HS对支持细胞早期凋亡率的影响 | 第59-60页 |
| 3.3.4 HS对紧密连接相关蛋白表达量的影响 | 第60-61页 |
| 3.3.5 HS对Claudin-11 表达部位的影响 | 第61-62页 |
| 3.4 讨论 | 第62-65页 |
| 4.AMPK在HS下调紧密连接相关蛋白表达中的作用 | 第65-91页 |
| 4.1 材料与方法 | 第66-68页 |
| 4.1.1 实验材料 | 第66页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第66-67页 |
| 4.1.3 主要试剂配制 | 第67-68页 |
| 4.1.4 主要实验仪器 | 第68页 |
| 4.2 实验方法 | 第68-74页 |
| 4.2.1 HS处理 | 第68页 |
| 4.2.2 STO609对CaMKKβ表达量及AMPK活性的影响 | 第68-69页 |
| 4.2.3 AICAR对AMPK活性及紧密连接相关蛋白表达的影响 | 第69页 |
| 4.2.4 AMPK过表达载体的构建 | 第69-72页 |
| 4.2.5 AMPK干涉片段的设计与合成 | 第72-73页 |
| 4.2.6 细胞转染 | 第73页 |
| 4.2.7 统计分析 | 第73-74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-89页 |
| 4.3.1 HS对AMPK磷酸化水平的影响 | 第74页 |
| 4.3.2 HS对AMPK上游通路的影响 | 第74-75页 |
| 4.3.3 STO609对AMPK磷酸化水平的影响 | 第75-76页 |
| 4.3.4 AICAR对AMPK的激活作用 | 第76-77页 |
| 4.3.5 激活AMPK对紧密连接相关蛋白表达的影响 | 第77-81页 |
| 4.3.6 过表达载体pcDNA-AMPK对AMPK表达量的影响 | 第81页 |
| 4.3.7 过表达AMPK对紧密连接相关蛋白表达的影响 | 第81-85页 |
| 4.3.8 AMPK siRNA对AMPK的沉默效应 | 第85页 |
| 4.3.9 干涉AMPK对紧密连接相关蛋白表达的影响 | 第85-89页 |
| 4.4 讨论 | 第89-91页 |
| 5.氧化应激在HS调控紧密连接相关蛋白表达中的作用 | 第91-115页 |
| 5.1 材料与方法 | 第91-94页 |
| 5.1.1 实验材料 | 第91-92页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第92-93页 |
| 5.1.3 主要试剂配制 | 第93-94页 |
| 5.1.4 主要实验仪器 | 第94页 |
| 5.2 实验方法 | 第94-99页 |
| 5.2.1 支持细胞内活性氧（ROS）水平检测 | 第94-95页 |
| 5.2.2 支持细胞内脂质氧化（MDA）水平检测 | 第95页 |
| 5.2.3 支持细胞内总超氧化物歧化酶（SOD）活性检测 | 第95-96页 |
| 5.2.4 支持细胞内总谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性检测 | 第96-97页 |
| 5.2.5 支持细胞内过氧化氢酶（CAT）活性检测 | 第97-98页 |
| 5.2.6 支持细胞内ATP水平检测 | 第98页 |
| 5.2.7 支持细胞内线粒体膜电位检测 | 第98-99页 |
| 5.2.8 统计分析 | 第99页 |
| 5.3 实验结果 | 第99-111页 |
| 5.3.1 HS对支持细胞ROS水平的影响 | 第99-100页 |
| 5.3.2 HS对支持细胞MDA水平的影响 | 第100-101页 |
| 5.3.3 HS对支持细胞SOD活性的影响 | 第101页 |
| 5.3.4 HS对支持细胞GSH-Px活性的影响 | 第101-102页 |
| 5.3.5 HS对支持细胞CAT活性的影响 | 第102-103页 |
| 5.3.6 NAC对支持细胞活力的影响 | 第103页 |
| 5.3.7 NAC对支持细胞MDA水平的影响 | 第103-104页 |
| 5.3.8 NAC对支持细胞ROS水平的影响 | 第104-105页 |
| 5.3.9 NAC对支持细胞SOD活性的影响 | 第105页 |
| 5.3.10 NAC对支持细胞GSH-Px活性的影响 | 第105-106页 |
| 5.3.11 NAC对支持细胞CAT活性的影响 | 第106-107页 |
| 5.3.12 NAC对支持细胞早期凋亡率的影响 | 第107页 |
| 5.3.13 NAC对支持细胞Ca MKKβ 表达量及AMPK磷酸化水平的影响 | 第107-108页 |
| 5.3.14 NAC对紧密连接相关蛋白表达量及表达部位的影响 | 第108-111页 |
| 5.4 讨论 | 第111-115页 |
| 6.全文总结与结论 | 第115-119页 |
| 6.1 全文总结 | 第115-116页 |
| 6.2 结论 | 第116-119页 |
| 论文创新点 | 第119-121页 |
| 参考文献 | 第121-137页 |
| 附录 | 第137-139页 |
| 博士在读期间发表的论文、主持及参与的课题 | 第139-141页 |
| 致谢 | 第141页 |
