| 致谢 | 第5-6页 |
| 中文摘要 | 第6-9页 |
| 英文摘要 | 第9-12页 |
| 英文缩写词表 | 第13-18页 |
| 引言 | 第18-21页 |
| 第1章 问号钩体目的基因原核表达系统构建及表达产物抗体制备 | 第21-41页 |
| 1.1 材料与方法 | 第21-32页 |
| 1.1.1 主要仪器及器材 | 第21-22页 |
| 1.1.2 主要试剂 | 第22-23页 |
| 1.1.3 问号钩体菌株及培养 | 第23-24页 |
| 1.1.4 实验动物 | 第24页 |
| 1.1.5 实验方法 | 第24-32页 |
| 1.1.5.1 问号钩体目的基因生物信息学分析 | 第24页 |
| 1.1.5.2 不同血清群和血清型问号钩体基因组DNA提取 | 第24-25页 |
| 1.1.5.3 目的基因扩增 | 第25-27页 |
| 1.1.5.4 扩增产物检测及提纯 | 第27页 |
| 1.1.5.5 扩增产物T-A克隆及测序 | 第27-28页 |
| 1.1.5.6 目的基因重组表达载体构建与转化 | 第28-30页 |
| 1.1.5.7 目的重组蛋白表达与产物提纯 | 第30-31页 |
| 1.1.5.8 目的重组蛋白兔抗体制备及其效价检测 | 第31-32页 |
| 1.2 实验结果 | 第32-41页 |
| 1.2.1 问号钩体目的基因产物信号肽和跨膜及功能结构域分析结果 | 第32-36页 |
| 1.2.2 不同血清群和血清型钩体目的基因分布及序列比较结果 | 第36-38页 |
| 1.2.3 重组测序质粒双酶切鉴定结果 | 第38-39页 |
| 1.2.4 目的重组蛋白表达及提纯效果 | 第39页 |
| 1.2.5 兔抗血清及其IgG效价测定结果 | 第39-41页 |
| 第2章 问号钩体目的重组蛋白金属蛋白酶酶学活性研究 | 第41-54页 |
| 2.1 材料与方法 | 第41-46页 |
| 2.1.1 主要仪器及器材 | 第41-42页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第42-43页 |
| 2.1.3 实验方法 | 第43-46页 |
| 2.1.3.1 金属蛋白酶活性及其反应条件测定 | 第43-44页 |
| 2.1.3.2 胞外基质分子水解试验 | 第44-45页 |
| 2.1.3.3 酶动力学参数测定 | 第45页 |
| 2.1.3.4 金属蛋白酶抑制剂阻断试验 | 第45页 |
| 2.1.3.5 金属离子螯合剂抑制试验 | 第45页 |
| 2.1.3.6 统计学方法 | 第45-46页 |
| 2.2 实验结果 | 第46-54页 |
| 2.2.1 金属蛋白酶活性测定结果及其最适反应条件 | 第46-48页 |
| 2.2.2 胞外基质分子水解试验结果 | 第48-51页 |
| 2.2.3 Km和Kcat值测定结果 | 第51-52页 |
| 2.2.4 金属蛋白酶抑制剂阻断试验结果 | 第52-53页 |
| 2.2.5 金属离子螯合剂抑制试验结果 | 第53-54页 |
| 第3章 问号钩体感染细胞时金属蛋白酶表达和外分泌检测 | 第54-61页 |
| 3.1 材料与方法 | 第54-57页 |
| 3.1.1 主要仪器及器材 | 第54页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第54-55页 |
| 3.1.3 实验方法 | 第55-57页 |
| 3.1.3.1 问号钩体感染细胞模型 | 第55页 |
| 3.1.3.2 问号钩体MMPs-mRNAs检测 | 第55-56页 |
| 3.1.3.3 问号钩体MMPs蛋白检测 | 第56-57页 |
| 3.1.3.4 问号钩体MMPs外分泌检测 | 第57页 |
| 3.1.3.5 统计学方法 | 第57页 |
| 3.2 实验结果 | 第57-61页 |
| 3.2.1 问号钩体感染细胞后MMPs-mRNAs水平升高 | 第57-59页 |
| 3.2.2 问号钩体感染细胞后MMPs表达上调 | 第59页 |
| 3.2.3 问号钩体感染细胞后MMPs外分泌增加 | 第59-61页 |
| 第4章 问号钩体基质金属蛋白酶基因敲除突变株构建及鉴定 | 第61-72页 |
| 4.1 材料与方法 | 第61-68页 |
| 4.1.1 主要仪器及器材 | 第61-62页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第62页 |
| 4.1.3 实验方法 | 第62-68页 |
| 4.1.3.1 自杀质粒构建 | 第62-67页 |
| 4.1.3.2 靶基因敲除突变株鉴定 | 第67-68页 |
| 4.1.3.3 统计学方法 | 第68页 |
| 4.2 实验结果 | 第68-72页 |
| 4.2.1 暗视野显微镜检查结果 | 第68页 |
| 4.2.2 生长试验结果 | 第68-69页 |
| 4.2.3 PCR检测结果 | 第69-70页 |
| 4.2.4 PCR产物测序结果 | 第70-71页 |
| 4.2.5 Western Blot检测结果 | 第71-72页 |
| 第5章 问号钩体基质金属蛋白酶侵袭及致病作用 | 第72-82页 |
| 5.1 材料与方法 | 第72-75页 |
| 5.1.1 主要仪器及器材 | 第72页 |
| 5.1.2 主要试剂 | 第72-73页 |
| 5.1.3 实验方法 | 第73-75页 |
| 5.1.3.1 Transwell试验 | 第73-74页 |
| 5.1.3.2 LD_(50)测定 | 第74页 |
| 5.1.3.3 金地鼠感染试验 | 第74-75页 |
| 5.1.3.4 统计学方法 | 第75页 |
| 5.2 实验结果 | 第75-82页 |
| 5.2.1 Transwell试验结果 | 第75-77页 |
| 5.2.2 LD_(50)测定结果 | 第77页 |
| 5.2.3 感染金地鼠外周血钩体计数结果 | 第77页 |
| 5.2.4 感染金地鼠组织中钩体载量及计数结果 | 第77-80页 |
| 5.2.5 感染金地鼠尿液中钩体计数结果 | 第80页 |
| 5.2.6 感染金地鼠病理学检查结果 | 第80-82页 |
| 讨论 | 第82-86页 |
| 参考文献 | 第86-94页 |
| 综述 | 第94-103页 |
| 参考文献 | 第98-103页 |
| 作者简历及其在读研期间所取得的科研成果 | 第103-105页 |
