| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 缩写、符号清单、术语表 | 第10-16页 |
| 第一章 绪论 | 第16-30页 |
| 1.1 tRNA修饰 | 第16-20页 |
| 1.2 线粒体tRNA修饰 | 第20-22页 |
| 1.3 耳聋 | 第22-24页 |
| 1.4 立题背景 | 第24-30页 |
| 第二章 实验材料以及实验方法 | 第30-74页 |
| 2.1 实验材料 | 第30-34页 |
| 2.1.1 实验细胞系以及菌株 | 第30页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第31-33页 |
| 2.1.4 实验试剂的配制方法 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-74页 |
| 2.2.1 外周血样本的采集 | 第34-35页 |
| 2.2.2 使用EB病毒转化B淋巴细胞建立永生化细胞系 | 第35-36页 |
| 2.2.3 基因组DNA的提取 | 第36-37页 |
| 2.2.4 线粒体DNA测序分析 | 第37-40页 |
| 2.2.5 淋巴细胞胞质融合到ρ~0细胞 | 第40-42页 |
| 2.2.6 酶切鉴定胞质杂交融合细胞系的基因型 | 第42-45页 |
| 2.2.7 胞质杂交融合细胞系线粒体DNA拷贝数鉴定 | 第45-46页 |
| 2.2.8 tRNA的稳定评估 | 第46-50页 |
| 2.2.9 Western Blotting实验方法 | 第50-53页 |
| 2.2.10 细胞线粒体蛋白合成的放射性同位素标记实验 | 第53-55页 |
| 2.2.11 细胞氧耗实验 | 第55-58页 |
| 2.2.12 线粒体呼吸链复合体酶活性的测定 | 第58-61页 |
| 2.2.13 细胞ATP产生水平的测定 | 第61-63页 |
| 2.2.14 细胞线粒体活性氧(ROS)产生水平的检测 | 第63-65页 |
| 2.2.15 线粒体膜电位的检测 | 第65-66页 |
| 2.2.16 基因表达在细胞内定位分析实验 | 第66-72页 |
| 2.2.17 基因RNA表达水平分析实验 | 第72-74页 |
| 第三章 实验结果 | 第74-105页 |
| 3.1 永生化淋巴细胞系的构建以及线粒体呼吸功能、ATP产生水平、ROS产生水平的检测 | 第74-81页 |
| 3.1.1 永生化淋巴细胞系的构建 | 第74页 |
| 3.1.2 线粒体基因组突变分析和7551A>G点突变酶切分析 | 第74-77页 |
| 3.1.3 永生化细胞系m.tRNA~(Asp)7551A>G突变异质性检测 | 第77-78页 |
| 3.1.4 携带tRNA~(Asp)7551A>G突变的永生化淋巴细胞系氧气消耗速率的降低 | 第78-79页 |
| 3.1.5 携带tRNA~(Asp)7551A>G突变的永生化淋巴细胞系ATP产生水平的检测 | 第79-80页 |
| 3.1.6 携带tRNA~(Asp)7551A>G突变的永生化淋巴细胞系ROS产生水平的检测 | 第80-81页 |
| 3.2 胞质杂交融合细胞系的构建,鉴定以及筛选 | 第81-83页 |
| 3.2.1 酶切结果鉴定胞质杂交融合细胞系基因型 | 第81-82页 |
| 3.2.2 检测细胞线粒体DNA拷贝数的实验结果 | 第82-83页 |
| 3.3 胞质杂交融合细胞系线粒体相关功能的检测 | 第83-101页 |
| 3.3.1 线粒体tRNA~(Asp)7551A>G突变导致细胞tRNAAsp水平显著降低 | 第83-85页 |
| 3.3.2 线粒体tRNA~(Asp)7551A>G突变导致细胞tRNAAsp氨酰化水平显著降低 | 第85-87页 |
| 3.3.3 线粒体tRNA~(Asp)7551A>G突变导致细胞蛋白质合成缺陷 | 第87-90页 |
| 3.3.4 放射性同位素标记实验线粒体tRNA~(Asp)7551A>G突变对组成线粒体的13种蛋白质的影响 | 第90-91页 |
| 3.3.5 线粒体tRNA~(Asp) 7551A>G突变导致细胞呼吸缺陷 | 第91-95页 |
| 3.3.6 线粒体tRNA~(Asp) 7551A>G突变导致细胞ATP水平降低 | 第95-97页 |
| 3.3.7 线粒体tRNA~(Asp) 7551A>G突变导致细胞ROS水平增高 | 第97-98页 |
| 3.3.8 线粒体tRNA~(Asp) 7551A>G突变对细胞线粒体膜电位没有显著影响 | 第98-99页 |
| 3.3.9 线粒体tRNA~(Asp) 7551A>G突变对细胞线粒体自噬作用的检测 | 第99-101页 |
| 3.4 TRIT1和TRMT5基因在细胞内蛋白表达定位分析以及RNA水平检测 | 第101-105页 |
| 3.4.1 TRIT1和TRMT5基因在细胞内蛋白表达定位分析实验 | 第101-102页 |
| 3.4.2 TRIT1和TRMT5基因在细胞内RNA水平检测 | 第102-105页 |
| 第四章 讨论与总结 | 第105-108页 |
| 参考文献 | 第108-115页 |
| 附录Ⅰ 就读博士期间发表的论文 | 第115-117页 |
| 附录Ⅱ 致谢 | 第117页 |
