| 摘要 | 第3-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 缩略语表 | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第11-20页 |
| 1.1 病原 | 第11-14页 |
| 1.1.1 病毒形态结构 | 第11页 |
| 1.1.2 病毒理化特性与生物学特性 | 第11-12页 |
| 1.1.3 分子生物学特性 | 第12-14页 |
| 1.2 近年来IBR在我国流行情况 | 第14-15页 |
| 1.3 诊断方法 | 第15-17页 |
| 1.3.1 包涵体检查 | 第15页 |
| 1.3.2 病毒分离鉴定 | 第15-16页 |
| 1.3.3 血清学诊断 | 第16页 |
| 1.3.4 核酸诊断 | 第16-17页 |
| 1.4 IBR的防控 | 第17页 |
| 1.5 IBRV的gB、gE糖蛋白研究进展 | 第17-19页 |
| 1.5.1 gB糖蛋白 | 第17-18页 |
| 1.5.2 gE糖蛋白 | 第18-19页 |
| 1.6 生物信息学分析 | 第19页 |
| 1.7 研究的目的及意义 | 第19-20页 |
| 2 IBRV gB、gE基因生物信息学分析 | 第20-24页 |
| 2.1 材料 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20页 |
| 2.3 结果 | 第20-23页 |
| 2.3.1 IBRV gB、gE糖蛋白跨膜结构域分析结果 | 第20-21页 |
| 2.3.2 IBRV gB、gE糖蛋白信号肽预测结果 | 第21-22页 |
| 2.3.3 gB、gE糖蛋白细胞抗原表位参数预测结果 | 第22-23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-24页 |
| 3 IBRV截短gB、gE基因截短片段的PCR扩增、克隆及鉴定 | 第24-33页 |
| 3.1 材料 | 第24-26页 |
| 3.1.1 仪器与设备 | 第24页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第24-25页 |
| 3.1.3 载体与菌毒株 | 第25页 |
| 3.1.4 主要溶液的配置 | 第25页 |
| 3.1.5 引物的合成 | 第25-26页 |
| 3.2 方法 | 第26-30页 |
| 3.2.1 病毒基因组提取 | 第26页 |
| 3.2.2 对截短片段的PCR扩增 | 第26-27页 |
| 3.2.3 PCR产物电泳 | 第27页 |
| 3.2.4 凝胶回收PCR产物 | 第27-28页 |
| 3.2.5 连接 | 第28页 |
| 3.2.6 克隆质粒的转化 | 第28页 |
| 3.2.7 菌落的扩增培养 | 第28-29页 |
| 3.2.8 克隆质粒DNA的提取 | 第29页 |
| 3.2.9 pGEM-gB和pGEM-gE的鉴定 | 第29-30页 |
| 3.3 结果 | 第30-31页 |
| 3.3.1 PCR扩增结果 | 第30页 |
| 3.3.2 克隆质粒pGEM-gB和pGEM-gE PCR鉴定和双酶切鉴定结果 | 第30-31页 |
| 3.3.3 克隆质粒pGEM-gB和pGEM-gE测序鉴定结果 | 第31页 |
| 3.4 讨论 | 第31-33页 |
| 4 IBRV截短gB、gE基因的原核表达及鉴定 | 第33-44页 |
| 4.1 材料 | 第33-34页 |
| 4.1.1 仪器与设配 | 第33页 |
| 4.1.2 载体与菌株 | 第33页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第33页 |
| 4.1.4 主要溶液的配置 | 第33-34页 |
| 4.2 方法 | 第34-37页 |
| 4.2.1 克隆质粒和pET-32a载体的双酶切与回收 | 第34页 |
| 4.2.2 截短片段与pET-32a的连接与转化 | 第34-35页 |
| 4.2.3 pET-gB与pET-gE质粒的提取 | 第35页 |
| 4.2.4 pET-gB与pET-gE质粒的鉴定 | 第35页 |
| 4.2.5 重组gB和gE蛋白的诱导表达 | 第35-36页 |
| 4.2.6 SDS-PAGE电泳分析蛋白表达产物 | 第36页 |
| 4.2.7 免疫印迹鉴定 | 第36-37页 |
| 4.2.8 最佳诱导时间的优化 | 第37页 |
| 4.2.9 最佳IPTG浓度的优化 | 第37页 |
| 4.2.10 gE重组蛋白的纯化 | 第37页 |
| 4.3 结果 | 第37-41页 |
| 4.3.1 重组质粒pET-gB与pET-gE的PCR鉴定及双酶切鉴定结果 | 第37-38页 |
| 4.3.2 重组蛋白可溶性鉴定 | 第38-39页 |
| 4.3.3 免疫印迹鉴定结果 | 第39-40页 |
| 4.3.4 诱导时间优化结果 | 第40页 |
| 4.3.5 IPTG诱导浓度优化结果 | 第40-41页 |
| 4.3.6 gE重组蛋白的纯化结果 | 第41页 |
| 4.4 讨论 | 第41-44页 |
| 5 结论 | 第44-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-50页 |
| 作者简介 | 第50页 |
