| 缩略词表 | 第7-10页 |
| 摘要 | 第10-13页 |
| Abstract | 第13-16页 |
| 第一章 前言 | 第17-35页 |
| 1.1 寡核苷酸适配体 | 第17-18页 |
| 1.2 SELEX后优化（Post-SELEX） | 第18-21页 |
| 1.2.1 结构剪裁 | 第18-20页 |
| 1.2.2 定点突变 | 第20页 |
| 1.2.3 化学修饰 | 第20-21页 |
| 1.2.4 多价组合 | 第21页 |
| 1.3 适配体—靶分子相互作用时的亲和力评价技术 | 第21-26页 |
| 1.3.1 荧光各向异性法 | 第22页 |
| 1.3.2 后向散射干涉法 | 第22-23页 |
| 1.3.3 凝胶电泳迁移率变动分析 | 第23页 |
| 1.3.4 微量热泳动法 | 第23-24页 |
| 1.3.5 等温滴定量热法 | 第24-25页 |
| 1.3.6 表面等离子体共振技术 | 第25页 |
| 1.3.7 生物膜干涉技术 | 第25-26页 |
| 1.4 核酸适配体的结构表征技术 | 第26-30页 |
| 1.4.1 XRD | 第27-28页 |
| 1.4.2 NMR | 第28页 |
| 1.4.3 热熔曲线测定 | 第28-29页 |
| 1.4.4 CD | 第29页 |
| 1.4.5 荧光探针法 | 第29-30页 |
| 1.5 核酸适配体作为分析传感元件的进展 | 第30-32页 |
| 1.6 本文的立题依据及研究工作 | 第32-35页 |
| 第二章 一种步进型组合文库的构建及基于SPR的亲和评价优化方法研究 | 第35-55页 |
| 2.1 引言 | 第35-36页 |
| 2.2 仪器、材料与试剂 | 第36-37页 |
| 2.2.1 仪器 | 第36页 |
| 2.2.2 材料与试剂 | 第36-37页 |
| 2.3 实验方法 | 第37-42页 |
| 2.3.1 组合文库的构建 | 第37-39页 |
| 2.3.2 EPO-α 蛋白的单分子生物素化 | 第39-40页 |
| 2.3.3 SPR分析评价方法的建立 | 第40-41页 |
| 2.3.4 组合文库适配体序列评价分析 | 第41-42页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第42-54页 |
| 2.4.1 SPR筛选评价方法的建立 | 第42-48页 |
| 2.4.2 步进型适配体组合文库的构建 | 第48-49页 |
| 2.4.3 组合文库适配体序列分析评价 | 第49-54页 |
| 2.5 本章小结 | 第54-55页 |
| 第三章 最短适配体In27的简并序列及结合位点研究 | 第55-72页 |
| 3.1 引言 | 第55页 |
| 3.2 仪器、材料与试剂 | 第55-56页 |
| 3.2.1 仪器 | 第55-56页 |
| 3.2.2 材料与试剂 | 第56页 |
| 3.3 实验方法 | 第56-60页 |
| 3.3.1 CD谱图采集 | 第56页 |
| 3.3.2 In27序列定点突变分子群的构建 | 第56-57页 |
| 3.3.3 突变分子群中序列标准进样溶液配制 | 第57-58页 |
| 3.3.4 SPR分析评价 | 第58页 |
| 3.3.5 SA芯片上固定 39nt和In27对EPO-α 蛋白的MCK分析 | 第58页 |
| 3.3.6 不同亲和分子与EPO的亲和活性评价 | 第58-59页 |
| 3.3.6.1 EPO单克隆抗体与EPO-α 的MCK分析 | 第58-59页 |
| 3.3.6.2 EPO受体与EPO-α 的MCK分析 | 第59页 |
| 3.3.7 各亲和分子结合位点的SPR研究 | 第59-60页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第60-70页 |
| 3.4.1 CD表征In27的高级结构 | 第60页 |
| 3.4.2 突变分子群的SPR评价 | 第60-66页 |
| 3.4.3 In27的亲和识别特点 | 第66-70页 |
| 3.4.3.1 In27双价适配体的亲和识别 | 第66-67页 |
| 3.4.3.2 适配体、凝集素、单抗及受体在EPO-α 上的结合位点研究 | 第67-70页 |
| 3.5 本章小结 | 第70-72页 |
| 第四章 多种光谱技术对于适配体In27的活性高级结构特征研究 | 第72-82页 |
| 4.1 引言 | 第72-73页 |
| 4.2 仪器、材料与试剂 | 第73页 |
| 4.2.1 仪器 | 第73页 |
| 4.2.2 材料与试剂 | 第73页 |
| 4.3 实验方法 | 第73-74页 |
| 4.3.1 SPR评价 | 第73页 |
| 4.3.2 CD谱图采集 | 第73页 |
| 4.3.3 荧光测定 | 第73-74页 |
| 4.3.4 数据处理 | 第74页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第74-81页 |
| 4.4.1 SPR评价阳离子类型及浓度对In27/EPO-α 亲和力的影响 | 第74-76页 |
| 4.4.2 CD评价阳离子类型及浓度对In27可能形成的GQ结构的影响 | 第76-77页 |
| 4.4.3 荧光探针法表征Na+浓度对In27可能形成的GQ结构的影响 | 第77-80页 |
| 4.4.3.1 利用荧光探针ThT研究In27的GQ结构 | 第77-79页 |
| 4.4.3.2 利用荧光探针NMM研究In27的GQ结构 | 第79-80页 |
| 4.4.4 EPO-α 荧光滴定 | 第80-81页 |
| 4.5 本章小结 | 第81-82页 |
| 第五章 基于适配体的EPO-α 免标记检测方法研究 | 第82-94页 |
| 5.1 引言 | 第82页 |
| 5.2 仪器、材料与试剂 | 第82-83页 |
| 5.2.1 仪器 | 第82-83页 |
| 5.2.2 材料与试剂 | 第83页 |
| 5.3 实验方法 | 第83-84页 |
| 5.3.1 SA传感芯片上固定生物素化适配体 | 第83页 |
| 5.3.2 分析检测条件优化 | 第83-84页 |
| 5.3.3 基于 39nt的EPO-α 检测 | 第84页 |
| 5.3.4 基于In27的EPO-α 检测 | 第84页 |
| 5.4 结果与讨论 | 第84-93页 |
| 5.4.1 生物素化适配体在SA传感芯片上的固定 | 第85-88页 |
| 5.4.1.1 生物素化适配体的空间取向 | 第85-86页 |
| 5.4.1.2 适配体的固定浓度 | 第86-87页 |
| 5.4.1.3 In27与末端生物素间的连接臂长度 | 第87-88页 |
| 5.4.2 EPO-α 蛋白检测的优化 | 第88-89页 |
| 5.4.3 基于 39nt的EPO-α 检测 | 第89-90页 |
| 5.4.4 基于In27的EPO-α 检测 | 第90-91页 |
| 5.4.5 SPR技术与BLI技术的比较 | 第91-93页 |
| 5.5 本章小结 | 第93-94页 |
| 研究总结 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-106页 |
| 附录一 个人简历 | 第106-107页 |
| 附录二 攻读硕士学位期间发表文章和专利 | 第107-108页 |
| 致谢 | 第108-109页 |
