| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第11-22页 |
| 1.1 原生质体分离及转化概况 | 第11-14页 |
| 1.1.1 原生质体分离 | 第11-14页 |
| 1.1.2 原生质体转化 | 第14页 |
| 1.2 CRISPR-Cas系统研究概况 | 第14-19页 |
| 1.2.1 研究历史 | 第14-15页 |
| 1.2.2 CRISPR基因座结构 | 第15-16页 |
| 1.2.3 CRISPR-Cas系统分类及免疫作用机制 | 第16-17页 |
| 1.2.4 CRISPR/Cas9系统的设计原理 | 第17-18页 |
| 1.2.5 CRISPR/Cas9系统应用 | 第18页 |
| 1.2.6 CRISPR/Cas9系统展望 | 第18-19页 |
| 1.3 落粒相关基因研究进展 | 第19-20页 |
| 1.4 技术路线 | 第20页 |
| 1.5 研究目的及意义 | 第20-22页 |
| 2 蒙古冰草叶肉细胞原生质体分离最适条件的探索及瞬时表达体系的建立 | 第22-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第22-26页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第22页 |
| 2.1.2 实验仪器与试剂 | 第22页 |
| 2.1.3 试剂配制 | 第22-24页 |
| 2.1.4 植株培养 | 第24页 |
| 2.1.5 原生质体的提取与转化 | 第24-25页 |
| 2.1.6 原生质体活力测定 | 第25页 |
| 2.1.7 原生质体的转化 | 第25-26页 |
| 2.2 结果与分析 | 第26-29页 |
| 2.2.1 蒙古冰草幼茎原生质体最佳分离条件的确定 | 第26-27页 |
| 2.2.2 蒙古冰草幼苗叶片原生质体最佳分离条件的确定 | 第27-28页 |
| 2.2.3 蒙古冰草幼茎和叶片原生质体分离比较 | 第28-29页 |
| 2.3 讨论 | 第29-31页 |
| 2.4 结论 | 第31-32页 |
| 3 利用CRISPR/Cas9技术对蒙古冰草落粒相关基因Sh1基因进行研究 | 第32-45页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-39页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 实验仪器与试剂 | 第32页 |
| 3.1.3 原始载体 | 第32页 |
| 3.1.4 载体的构建 | 第32-35页 |
| 3.1.5 大肠杆菌转化(热激法) | 第35页 |
| 3.1.6 大肠杆菌中质粒的提取 | 第35-37页 |
| 3.1.7 原生质体提取及转化 | 第37页 |
| 3.1.8 植物基因组DNA提取 | 第37页 |
| 3.1.9 突变体检测方法 | 第37-39页 |
| 3.2 结果与分析 | 第39-42页 |
| 3.2.1 序列查找与靶位点选择 | 第39-40页 |
| 3.2.2 CRISPR/Cas9载体构建 | 第40-41页 |
| 3.2.3 突变体检测 | 第41-42页 |
| 3.2.4 突变率及突变类型的统计和计算 | 第42页 |
| 3.3 讨论 | 第42-43页 |
| 3.4 结论 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
