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枯草芽孢杆菌木糖诱导型穿梭质粒的构建

摘要第3-4页
Abstract第4页
第一章 绪论第7-15页
    1.1 枯草芽孢杆菌第7-9页
        1.1.1 芽孢杆菌第7页
        1.1.2 枯草芽孢杆菌的工业应用第7-8页
        1.1.3 组成型表达第8-9页
        1.1.4 诱导型表达第9页
    1.2 木糖启动子第9-10页
    1.3 枯草芽孢杆菌常用表达载体第10-11页
    1.4 海藻糖及海藻糖合成酶第11-14页
        1.4.1 海藻糖第11-12页
        1.4.2 海藻糖的生产途径第12-13页
        1.4.3 海藻糖合成酶第13页
        1.4.4 海藻糖合成酶系第13-14页
    1.5 本课题的意义和研究内容第14-15页
第二章 实验材料与方法第15-24页
    2.1 实验材料第15-17页
        2.1.1 菌株和质粒第15页
        2.1.2 培养基试剂配制第15-16页
        2.1.3 试剂及试剂盒第16页
        2.1.4 仪器设备第16-17页
        2.1.5 引物第17页
    2.2 重组质粒的构建第17-20页
        2.2.1 芽孢杆菌染色体的提取第17-18页
        2.2.2 目的片段PCR扩增第18页
        2.2.3 DNA片段纯化第18页
        2.2.4 扩增片段与载体的连接第18-19页
        2.2.5 制备与转化E.coli JM109感受态细胞第19页
        2.2.6 制备与转化B. subtilis WB600感受态细胞第19-20页
        2.2.7 转化子菌落PCR验证第20页
        2.2.8 转化子酶切验证第20页
    2.3 重组酶的异源表达第20-22页
        2.3.1 重组酶的诱导表达第20页
        2.3.2 重组酶的组成型表达第20-21页
        2.3.3 双酶法生产海藻糖酶活的检测第21页
        2.3.4 单酶法生产海藻糖酶活的检测第21页
        2.3.5 重组枯草芽孢杆菌生长曲线的测定第21页
        2.3.6 不同碳源对酶活的影响第21页
        2.3.7 不同氮源对酶活的影响第21页
        2.3.8 诱导剂不同添加时间对酶活的影响第21-22页
    2.4 分析方法第22-24页
        2.4.1 糖含量检测第22页
        2.4.2 蛋白含量检测第22页
        2.4.3 海藻糖酶活检测第22-24页
第三章 结果与讨论第24-38页
    3.1 木糖诱导型重组载体的构建第24-28页
        3.1.1 基于密码子水平的表达优化第24-25页
        3.1.2 重组表达质粒的构建第25-26页
        3.1.3 MTSase和MTHase在大肠杆菌中的异源表达第26-28页
        3.1.4 小结第28页
    3.2 MTSase和MTHase在枯草芽孢杆菌中的异源表达第28-34页
        3.2.1 重组表达质粒在枯草芽孢杆菌WB600中的表达第28-30页
        3.2.2 不同发酵培养基对重组菌产酶的影响第30-32页
        3.2.3 重组菌生长曲线的测定第32页
        3.2.4 诱导剂不同添加时间对重组菌产酶的影响第32-33页
        3.2.5 诱导剂不同添加量对重组菌产酶的影响第33页
        3.2.6 小结第33-34页
    3.3 弯曲高温单孢菌海藻糖合成酶基因在芽孢杆菌中的诱导及组成型表达第34-38页
        3.3.1 组成型重组载体的构建第34-35页
        3.3.2 单酶法重组质粒的构建第35-36页
        3.3.3 不同酶法生产海藻糖的比较第36-37页
        3.3.4 小结第37-38页
主要结论与展望第38-39页
致谢第39-40页
参考文献第40-43页
附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文第43页

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