| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第7-15页 |
| 1.1 枯草芽孢杆菌 | 第7-9页 |
| 1.1.1 芽孢杆菌 | 第7页 |
| 1.1.2 枯草芽孢杆菌的工业应用 | 第7-8页 |
| 1.1.3 组成型表达 | 第8-9页 |
| 1.1.4 诱导型表达 | 第9页 |
| 1.2 木糖启动子 | 第9-10页 |
| 1.3 枯草芽孢杆菌常用表达载体 | 第10-11页 |
| 1.4 海藻糖及海藻糖合成酶 | 第11-14页 |
| 1.4.1 海藻糖 | 第11-12页 |
| 1.4.2 海藻糖的生产途径 | 第12-13页 |
| 1.4.3 海藻糖合成酶 | 第13页 |
| 1.4.4 海藻糖合成酶系 | 第13-14页 |
| 1.5 本课题的意义和研究内容 | 第14-15页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第15-24页 |
| 2.1 实验材料 | 第15-17页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第15页 |
| 2.1.2 培养基试剂配制 | 第15-16页 |
| 2.1.3 试剂及试剂盒 | 第16页 |
| 2.1.4 仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.1.5 引物 | 第17页 |
| 2.2 重组质粒的构建 | 第17-20页 |
| 2.2.1 芽孢杆菌染色体的提取 | 第17-18页 |
| 2.2.2 目的片段PCR扩增 | 第18页 |
| 2.2.3 DNA片段纯化 | 第18页 |
| 2.2.4 扩增片段与载体的连接 | 第18-19页 |
| 2.2.5 制备与转化E.coli JM109感受态细胞 | 第19页 |
| 2.2.6 制备与转化B. subtilis WB600感受态细胞 | 第19-20页 |
| 2.2.7 转化子菌落PCR验证 | 第20页 |
| 2.2.8 转化子酶切验证 | 第20页 |
| 2.3 重组酶的异源表达 | 第20-22页 |
| 2.3.1 重组酶的诱导表达 | 第20页 |
| 2.3.2 重组酶的组成型表达 | 第20-21页 |
| 2.3.3 双酶法生产海藻糖酶活的检测 | 第21页 |
| 2.3.4 单酶法生产海藻糖酶活的检测 | 第21页 |
| 2.3.5 重组枯草芽孢杆菌生长曲线的测定 | 第21页 |
| 2.3.6 不同碳源对酶活的影响 | 第21页 |
| 2.3.7 不同氮源对酶活的影响 | 第21页 |
| 2.3.8 诱导剂不同添加时间对酶活的影响 | 第21-22页 |
| 2.4 分析方法 | 第22-24页 |
| 2.4.1 糖含量检测 | 第22页 |
| 2.4.2 蛋白含量检测 | 第22页 |
| 2.4.3 海藻糖酶活检测 | 第22-24页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第24-38页 |
| 3.1 木糖诱导型重组载体的构建 | 第24-28页 |
| 3.1.1 基于密码子水平的表达优化 | 第24-25页 |
| 3.1.2 重组表达质粒的构建 | 第25-26页 |
| 3.1.3 MTSase和MTHase在大肠杆菌中的异源表达 | 第26-28页 |
| 3.1.4 小结 | 第28页 |
| 3.2 MTSase和MTHase在枯草芽孢杆菌中的异源表达 | 第28-34页 |
| 3.2.1 重组表达质粒在枯草芽孢杆菌WB600中的表达 | 第28-30页 |
| 3.2.2 不同发酵培养基对重组菌产酶的影响 | 第30-32页 |
| 3.2.3 重组菌生长曲线的测定 | 第32页 |
| 3.2.4 诱导剂不同添加时间对重组菌产酶的影响 | 第32-33页 |
| 3.2.5 诱导剂不同添加量对重组菌产酶的影响 | 第33页 |
| 3.2.6 小结 | 第33-34页 |
| 3.3 弯曲高温单孢菌海藻糖合成酶基因在芽孢杆菌中的诱导及组成型表达 | 第34-38页 |
| 3.3.1 组成型重组载体的构建 | 第34-35页 |
| 3.3.2 单酶法重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| 3.3.3 不同酶法生产海藻糖的比较 | 第36-37页 |
| 3.3.4 小结 | 第37-38页 |
| 主要结论与展望 | 第38-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第43页 |
