| 中文摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 第一章 绪论 | 第13-25页 |
| 1.1 融合蛋白标签技术 | 第13-14页 |
| 1.2 融合蛋白标签 | 第14-19页 |
| 1.2.1 融合蛋白标签的分类 | 第15-16页 |
| 1.2.2 融合蛋白标签的功能 | 第16-19页 |
| 1.3 融合蛋白标签的应用 | 第19-21页 |
| 1.3.1 蛋白质的固定和检测 | 第19页 |
| 1.3.2 蛋白质的纯化 | 第19-20页 |
| 1.3.3 融合蛋白标签在其他领域的应用 | 第20-21页 |
| 1.4 融合蛋白标签的发展前景 | 第21页 |
| 1.5 透明颤菌血红蛋白 | 第21-22页 |
| 1.6 果胶裂解酶 | 第22页 |
| 1.7 碱性果胶裂解酶催化结构域CD | 第22页 |
| 1.8 凝血酶 | 第22-23页 |
| 1.9 本课题的立题意义和研究内容 | 第23-25页 |
| 第二章 融合蛋白（Fusion）表达载体的构建 | 第25-43页 |
| 2.1 实验仪器和试剂 | 第25-27页 |
| 2.1.1 实验仪器 | 第25页 |
| 2.1.2 实验用的菌体和质粒 | 第25页 |
| 2.1.3 实验试剂及配置方法 | 第25-26页 |
| 2.1.4 实验用酶和其它试剂 | 第26-27页 |
| 2.2 实验设计 | 第27-28页 |
| 2.3 实验方法 | 第28-36页 |
| 2.3.1 vgb+(Gly)_5+Thrombin和CD基因的扩增 | 第28-31页 |
| 2.3.1.1 引物设计及扩增 | 第28-30页 |
| 2.3.1.2 PCR产物的回收纯化 | 第30-31页 |
| 2.3.2 vgb+(Gly)_5+Thrombin和CD基因连入pMD19-T载体 | 第31页 |
| 2.3.3 E.coli DH5α 感受态细胞的制备 | 第31页 |
| 2.3.4 重组质粒的热激转化 | 第31-32页 |
| 2.3.5 重组质粒的提取及验证 | 第32-33页 |
| 2.3.6 pMD19-T重组质粒的双酶切验证及目的基因的分离 | 第33页 |
| 2.3.7 pUC19+promter+vgb质粒的双酶切及载体片段的分离 | 第33-34页 |
| 2.3.8 pUC19+promter载体片段和vgb+(Gly)_5+Thrombin基因片段的连接及验证 | 第34-35页 |
| 2.3.8.1 pUC19+promter和vgb+(Gly)_5+Thrombin基因片段连接 | 第34页 |
| 2.3.8.2 重组质粒pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin的提取 | 第34页 |
| 2.3.8.3 pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin质粒双酶切 | 第34-35页 |
| 2.3.9 pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin片段和CD基因片段的连接及验证 | 第35-36页 |
| 2.3.9.1 pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin片段和CD基因的连接 | 第35页 |
| 2.3.9.2 重组质粒pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin+CD的提取及验证 | 第35-36页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第36-42页 |
| 2.4.1 vgb+(Gly)_5+Thrombin基因和CD基因的PCR扩增 | 第36页 |
| 2.4.2 pMD19-T+vgb+(Gly)_5+Thrombin质粒和p MD19-T+CD质粒的琼脂糖电泳 | 第36-37页 |
| 2.4.3 pMD19-T重组质粒双酶切产物的验证 | 第37页 |
| 2.4.4 重组质粒pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin的验证 | 第37-38页 |
| 2.4.5 重组质粒pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin+CD的验证 | 第38页 |
| 2.4.6 重组质粒pUC19+promter+vgb+(Gly)_5+Thrombin+CD的测序 | 第38-42页 |
| 2.4.6.1 重组质粒的基因拼接序列 | 第38-40页 |
| 2.4.6.2 重组质粒的基因测序图谱 | 第40-42页 |
| 2.5 小结 | 第42-43页 |
| 第三章 融合蛋白（Fusion）的表达和纯化 | 第43-51页 |
| 3.1 实验仪器和试剂 | 第43-45页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第43页 |
| 3.1.2 实验试剂及配制方法 | 第43-45页 |
| 3.2 融合蛋白的表达和纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.1 融合蛋白的表达 | 第45页 |
| 3.2.2 融合蛋白的纯化 | 第45-46页 |
| 3.2.2.1 超声破碎 | 第45-46页 |
| 3.2.2.2 镍柱纯化 | 第46页 |
| 3.2.2.3 除盐层析 | 第46页 |
| 3.3 VHb和CD的表达和纯化 | 第46-47页 |
| 3.4 融合蛋白纯度和电泳检测 | 第47页 |
| 3.4.1 融合蛋白纯度检测 | 第47页 |
| 3.4.2 融合蛋白SDS-PAGE电泳 | 第47页 |
| 3.5 实验结果与讨论 | 第47-49页 |
| 3.5.1 融合蛋白的颜色 | 第47-48页 |
| 3.5.2 融合蛋白的纯度 | 第48-49页 |
| 3.5.3 融合蛋白SDS-PAGE电泳 | 第49页 |
| 3.6 小结 | 第49-51页 |
| 第四章 融合蛋白活性检测及光谱表征 | 第51-58页 |
| 4.1 融合蛋白活性检测 | 第51页 |
| 4.1.1 融合蛋白中VHb活性检测 | 第51页 |
| 4.1.2 融合蛋白中CD活性检测 | 第51页 |
| 4.2 融合蛋白光谱表征 | 第51-52页 |
| 4.2.1 融合蛋白紫外可见光吸收光谱 | 第51页 |
| 4.2.2 融合蛋白荧光光谱检测 | 第51-52页 |
| 4.2.3 融合蛋白圆二色谱检测 | 第52页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第52-56页 |
| 4.3.1 融合蛋白活性检测 | 第52-54页 |
| 4.3.1.1 融合蛋白的过氧化物酶活性检测 | 第52-53页 |
| 4.3.1.2 融合蛋白中CD活性检测 | 第53-54页 |
| 4.3.2 融合蛋白光谱表征 | 第54-56页 |
| 4.3.2.1 融合蛋白紫外吸收光谱 | 第54-55页 |
| 4.3.2.2 融合蛋白的荧光光谱 | 第55页 |
| 4.3.2.3 融合蛋白的圆二色谱 | 第55-56页 |
| 4.4 小结 | 第56-58页 |
| 第五章 总结 | 第58-60页 |
| 参考文献 | 第60-64页 |
| 作者简介及攻读硕士学位期间发表的学术成果 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
