| 摘要 | 第3-9页 |
| ABSTRACT | 第9-15页 |
| 前言 | 第19-20页 |
| 材料与方法 | 第20-40页 |
| 1. 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2. 主要试剂及配制方法 | 第21-26页 |
| 3. 组织的收集和取材 | 第26-27页 |
| 3.1 患者基本情况 | 第26页 |
| 3.2 组织取材 | 第26-27页 |
| 4. 免疫组织化学(Immunohistochemistry) | 第27-28页 |
| 5. 人子宫内膜基质细胞(HESC)的培养、传代、转染、冻存和复苏 | 第28-31页 |
| 5.1 永生化人子宫内膜基质细胞(T-HESCs)的培养 | 第28-29页 |
| 5.2 原代HESC的分离和培养 | 第29页 |
| 5.3 细胞传代 | 第29-30页 |
| 5.4 siRNA转染HESC | 第30页 |
| 5.5 细胞冻存 | 第30-31页 |
| 5.6 细胞复苏 | 第31页 |
| 6. 细胞增殖检测(MTS) | 第31-32页 |
| 7. 总RNA的提取和逆转录PCR(RT-PCR) | 第32-34页 |
| 7.1 Trizol试剂抽提法提取总RNA | 第32-33页 |
| 7.2 RNA逆转录 | 第33页 |
| 7.3 Quantitative Real-time PCR反应 | 第33-34页 |
| 8. 细胞免疫荧光(Immunofluorescence) | 第34-35页 |
| 9. 蛋白质免疫印迹(Western Blotting) | 第35-37页 |
| 9.1 蛋白的提取 | 第35页 |
| 9.2 蛋白浓度的测定 | 第35-36页 |
| 9.3 实验步骤 | 第36-37页 |
| 10. 流式细胞术(Flow Cytometry) | 第37-38页 |
| 11. 细胞衰老-β-半乳糖苷酶染色(SA-β-gal染色) | 第38-39页 |
| 12. 数据的统计分析(Statistical analysis) | 第39-40页 |
| 结果与分析 | 第40-80页 |
| 1、NEDD8在人月经周期子宫内膜的表达模式 | 第40-44页 |
| 2、NEDD8在人子宫内膜基质细胞(HESC)中的表达 | 第44-48页 |
| 2.1 HESC细胞蜕膜化体系的建立 | 第44-46页 |
| 2.2 NEDD8在增殖和分化HESC中的表达 | 第46-48页 |
| 3、MLN4924特异性抑制HESC中NEDD8介导的neddylation修饰 | 第48-51页 |
| 3.1 MLN4924在T-HESCs中的运用 | 第48-50页 |
| 3.2 MLN4924在原代HESC中的运用 | 第50-51页 |
| 4、MLN4924导致HESC细胞增殖的异常 | 第51-55页 |
| 5、MLN4924导致HESC细胞周期的异常 | 第55-59页 |
| 6、MLN4924导致HESC蜕膜化的异常 | 第59-65页 |
| 7、抑制HESC中neddylation导致p21的积聚和细胞衰老的增加 | 第65-70页 |
| 8、MLN4924不诱导HESC细胞的凋亡 | 第70-71页 |
| 9、p21敲降可以部分挽救MLN4924导致的增殖异常和细胞衰老的增加 | 第71-80页 |
| 9.1 p21-siRNA在子宫内膜基质细胞中的运用 | 第71-74页 |
| 9.2 p21敲降可以部分挽救增殖的异常和细胞衰老的增加 | 第74-78页 |
| 9.3 p21敲降不能挽救分化的异常 | 第78-80页 |
| 讨论 | 第80-84页 |
| 结论 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-91页 |
| 综述 | 第91-116页 |
| 参考文献 | 第104-116页 |
| 中英文缩略词表 | 第116-117页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第117-118页 |
| 致谢 | 第118-121页 |
| 统计学证明 | 第121页 |
