摘要 | 第1-6页 |
ABSTRACT | 第6-12页 |
前言 | 第12-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-26页 |
·I群禽腺病毒的概况 | 第14-17页 |
·I群禽腺病毒的分类 | 第14页 |
·I群禽腺病毒的病原特征 | 第14-15页 |
·I群禽腺病毒的理化与培养特性 | 第15-16页 |
·I群禽腺病毒的流行病学 | 第16-17页 |
·I群禽腺病毒的基因结构与蛋白 | 第17-20页 |
·I群禽腺病毒的基因组特点 | 第17-18页 |
·结构蛋白 | 第18-20页 |
·非结构蛋白 | 第20页 |
·I群禽腺病毒诊断技术研究进展 | 第20-22页 |
·I群禽腺病毒的分离鉴定 | 第20-21页 |
·I群禽腺病毒的血清学诊断方法 | 第21-22页 |
·I群禽腺病毒的分子生物学诊断方法 | 第22页 |
·ELISA鉴别诊断方法研究概况 | 第22-24页 |
·ELISA原理 | 第22-23页 |
·ELISA诊断方法种类 | 第23-24页 |
·ELISA鉴别诊断 | 第24页 |
·研究的目的和意义 | 第24-26页 |
第二章 I群禽腺病毒分离鉴定和hexon基因的克隆与序列分析 | 第26-36页 |
·材料与方法 | 第27-31页 |
·鸡胚、毒株和血清 | 第27页 |
·受体菌、载体和主要试剂 | 第27页 |
·病毒的分离 | 第27页 |
·PCR鉴定 | 第27-28页 |
·免疫琼脂扩散 | 第28页 |
·血凝试验 | 第28-29页 |
·鸡胚肝细胞的培养及细胞病变观察 | 第29页 |
·形态学观察 | 第29页 |
·鸡胚致病性试验 | 第29页 |
·DNA提取与PCR扩增 | 第29-30页 |
·克隆、测序和分析 | 第30页 |
·TCID50的测定 | 第30-31页 |
·中和试验 | 第31页 |
·结果 | 第31-35页 |
·病毒的分离与PCR鉴定结果 | 第31-32页 |
·免疫琼脂扩散与血凝性 | 第32页 |
·细胞病变观察 | 第32页 |
·电镜负染观察 | 第32-33页 |
·鸡胚致病性试验 | 第33页 |
·PCR鉴定 | 第33页 |
·hexon基因序列比较和遗传进化分析 | 第33页 |
·TCID_(50)与中和试验结果 | 第33-35页 |
·讨论 | 第35-36页 |
第三章 I群禽腺病毒hexon、penton结构蛋白和100K、33K非结构蛋白原核表达、纯化及鉴定 | 第36-49页 |
·材料与方法 | 第37-41页 |
·病毒、鸡胚、受体菌、血清 | 第37页 |
·主要试剂 | 第37页 |
·病毒DNA的提取 | 第37页 |
·hexon、penton、100K和33K基因的PCR扩增 | 第37-38页 |
·PCR产物的克隆 | 第38-39页 |
·四种重组蛋白的表达及最佳诱导条件的探索 | 第39页 |
·四种重组蛋白的可溶性鉴定 | 第39页 |
·四种重组蛋白的纯化 | 第39-41页 |
·四种重组蛋白浓度与纯度的分析 | 第41页 |
·Western-blot检测 | 第41页 |
·结果 | 第41-47页 |
·四种基因的PCR扩增 | 第41页 |
·克隆与测序结果 | 第41-42页 |
·四种重组蛋白的表达结果 | 第42-44页 |
·四种重组蛋白的可溶性鉴定 | 第44-45页 |
·四种重组蛋白的纯化结果 | 第45页 |
·四种重组蛋白的Western-blot结果 | 第45-47页 |
·讨论 | 第47-49页 |
第四章 I群禽腺病毒E LISA鉴别诊断的研究 | 第49-72页 |
试验一 I群禽腺病毒hexon和penton结构蛋白作为ELISA诊断抗原的研究 | 第49-61页 |
·材料与方法 | 第49-52页 |
·血清 | 第49-50页 |
·主要试剂 | 第50页 |
·hexon和penton蛋白作为ELISA检测抗原方法的建立 | 第50-51页 |
·ELISA阴性、阳性临界值的确定 | 第51页 |
·特异性试验 | 第51-52页 |
·敏感性试验 | 第52页 |
·重复性试验 | 第52页 |
·hexon-penton-ELISA混合包被的摸索 | 第52页 |
·临床样品检测 | 第52页 |
·结果 | 第52-59页 |
·抗原最适包被浓度与血清最适稀释度的确定 | 第52-53页 |
·抗原最佳包被条件的确定 | 第53-54页 |
·最佳封闭液及封闭时间的确定 | 第54-55页 |
·—抗血清和酶标二抗最适作用时间的确定 | 第55页 |
·酶标二抗最佳浓度的确定 | 第55页 |
·ELISA程序的确定 | 第55-56页 |
·阴阳性判定标准的确定 | 第56页 |
·特异性试验 | 第56页 |
·敏感性试验 | 第56-57页 |
·重复性试验 | 第57-58页 |
·hexon-penton-ELISA混合包被的结果 | 第58-59页 |
·临床样品检测 | 第59页 |
·讨论 | 第59-61页 |
试验二 I群禽腺病毒100K和33K非结构蛋白作为ELISA鉴别诊断抗原的研究 | 第61-72页 |
·材料与方法 | 第62-63页 |
·血清 | 第62页 |
·主要试剂 | 第62页 |
·间接ELISA方法 | 第62页 |
·100K、33K包被抗原间接ELISA反应条件的确定 | 第62页 |
·阴、阳性临界值的确定 | 第62页 |
·特异性试验 | 第62-63页 |
·敏感性试验 | 第63页 |
·重复性试验 | 第63页 |
·100K-33K-ELISA混合包被的结果 | 第63页 |
·临床样品检测 | 第63页 |
·结果 | 第63-70页 |
·间接ELISA反应条件的优化 | 第63-66页 |
·ELISA程序的确定 | 第66页 |
·阴、阳性判定标准的确定 | 第66-67页 |
·特异性试验 | 第67页 |
·敏感性试验 | 第67页 |
·重复性试验 | 第67-70页 |
·100K-33K-ELISA混合包被的结果 | 第70页 |
·临床样品检测结果 | 第70页 |
·讨论 | 第70-72页 |
结论 | 第72-73页 |
参考文献 | 第73-80页 |
个人简历 | 第80页 |
攻读学位期间发表论文情况 | 第80页 |