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Ⅰ群禽腺病毒分离鉴定及重组蛋白ELISA鉴别诊断方法的研究

摘要第1-6页
ABSTRACT第6-12页
前言第12-14页
第一章 文献综述第14-26页
   ·I群禽腺病毒的概况第14-17页
     ·I群禽腺病毒的分类第14页
     ·I群禽腺病毒的病原特征第14-15页
     ·I群禽腺病毒的理化与培养特性第15-16页
     ·I群禽腺病毒的流行病学第16-17页
   ·I群禽腺病毒的基因结构与蛋白第17-20页
     ·I群禽腺病毒的基因组特点第17-18页
     ·结构蛋白第18-20页
     ·非结构蛋白第20页
   ·I群禽腺病毒诊断技术研究进展第20-22页
     ·I群禽腺病毒的分离鉴定第20-21页
     ·I群禽腺病毒的血清学诊断方法第21-22页
     ·I群禽腺病毒的分子生物学诊断方法第22页
   ·ELISA鉴别诊断方法研究概况第22-24页
     ·ELISA原理第22-23页
     ·ELISA诊断方法种类第23-24页
     ·ELISA鉴别诊断第24页
   ·研究的目的和意义第24-26页
第二章 I群禽腺病毒分离鉴定和hexon基因的克隆与序列分析第26-36页
   ·材料与方法第27-31页
     ·鸡胚、毒株和血清第27页
     ·受体菌、载体和主要试剂第27页
     ·病毒的分离第27页
     ·PCR鉴定第27-28页
     ·免疫琼脂扩散第28页
     ·血凝试验第28-29页
     ·鸡胚肝细胞的培养及细胞病变观察第29页
     ·形态学观察第29页
     ·鸡胚致病性试验第29页
     ·DNA提取与PCR扩增第29-30页
     ·克隆、测序和分析第30页
     ·TCID50的测定第30-31页
     ·中和试验第31页
   ·结果第31-35页
     ·病毒的分离与PCR鉴定结果第31-32页
     ·免疫琼脂扩散与血凝性第32页
     ·细胞病变观察第32页
     ·电镜负染观察第32-33页
     ·鸡胚致病性试验第33页
     ·PCR鉴定第33页
     ·hexon基因序列比较和遗传进化分析第33页
     ·TCID_(50)与中和试验结果第33-35页
   ·讨论第35-36页
第三章 I群禽腺病毒hexon、penton结构蛋白和100K、33K非结构蛋白原核表达、纯化及鉴定第36-49页
   ·材料与方法第37-41页
     ·病毒、鸡胚、受体菌、血清第37页
     ·主要试剂第37页
     ·病毒DNA的提取第37页
     ·hexon、penton、100K和33K基因的PCR扩增第37-38页
     ·PCR产物的克隆第38-39页
     ·四种重组蛋白的表达及最佳诱导条件的探索第39页
     ·四种重组蛋白的可溶性鉴定第39页
     ·四种重组蛋白的纯化第39-41页
     ·四种重组蛋白浓度与纯度的分析第41页
     ·Western-blot检测第41页
   ·结果第41-47页
     ·四种基因的PCR扩增第41页
     ·克隆与测序结果第41-42页
     ·四种重组蛋白的表达结果第42-44页
     ·四种重组蛋白的可溶性鉴定第44-45页
     ·四种重组蛋白的纯化结果第45页
     ·四种重组蛋白的Western-blot结果第45-47页
   ·讨论第47-49页
第四章 I群禽腺病毒E LISA鉴别诊断的研究第49-72页
 试验一 I群禽腺病毒hexon和penton结构蛋白作为ELISA诊断抗原的研究第49-61页
   ·材料与方法第49-52页
     ·血清第49-50页
     ·主要试剂第50页
     ·hexon和penton蛋白作为ELISA检测抗原方法的建立第50-51页
     ·ELISA阴性、阳性临界值的确定第51页
     ·特异性试验第51-52页
     ·敏感性试验第52页
     ·重复性试验第52页
     ·hexon-penton-ELISA混合包被的摸索第52页
     ·临床样品检测第52页
   ·结果第52-59页
     ·抗原最适包被浓度与血清最适稀释度的确定第52-53页
     ·抗原最佳包被条件的确定第53-54页
     ·最佳封闭液及封闭时间的确定第54-55页
     ·—抗血清和酶标二抗最适作用时间的确定第55页
     ·酶标二抗最佳浓度的确定第55页
     ·ELISA程序的确定第55-56页
     ·阴阳性判定标准的确定第56页
     ·特异性试验第56页
     ·敏感性试验第56-57页
     ·重复性试验第57-58页
     ·hexon-penton-ELISA混合包被的结果第58-59页
     ·临床样品检测第59页
   ·讨论第59-61页
 试验二 I群禽腺病毒100K和33K非结构蛋白作为ELISA鉴别诊断抗原的研究第61-72页
   ·材料与方法第62-63页
     ·血清第62页
     ·主要试剂第62页
     ·间接ELISA方法第62页
     ·100K、33K包被抗原间接ELISA反应条件的确定第62页
     ·阴、阳性临界值的确定第62页
     ·特异性试验第62-63页
     ·敏感性试验第63页
     ·重复性试验第63页
     ·100K-33K-ELISA混合包被的结果第63页
     ·临床样品检测第63页
   ·结果第63-70页
     ·间接ELISA反应条件的优化第63-66页
     ·ELISA程序的确定第66页
     ·阴、阳性判定标准的确定第66-67页
     ·特异性试验第67页
     ·敏感性试验第67页
     ·重复性试验第67-70页
     ·100K-33K-ELISA混合包被的结果第70页
     ·临床样品检测结果第70页
   ·讨论第70-72页
结论第72-73页
参考文献第73-80页
个人简历第80页
攻读学位期间发表论文情况第80页

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